● Yuqori sifatli yig'ish - turlarni aniqlash va funktsional genlarni bashorat qilishning aniqligini oshirish
● Yopiq bakterial genom izolyatsiyasi
● Turli sohalarda yanada kuchliroq va ishonchli qo'llash, masalan, patogen mikroorganizmlarni yoki antibiotiklarga qarshilik bilan bog'liq genlarni aniqlash
● qiyosiy metagenom tahlili
Platforma | Ketma-ketlik | Tavsiya etilgan maʼlumotlar | Qaytish vaqti |
Nanopor | ONT | 6 G/10 G | 65 ish kuni |
● Xom ma'lumotlar sifatini nazorat qilish
● Metagenom yig'ilishi
● Ortiqcha bo'lmagan genlar to'plami va izoh
● Turlarning xilma-xilligini tahlil qilish
● Genetik funktsiyalarning xilma-xilligini tahlil qilish
● Guruhlararo tahlil
● Eksperimental omillarga nisbatan assotsiatsiya tahlili
Namuna talablari:
UchunDNK ekstraktlari:
Namuna turi | Miqdori | Diqqat | Tozalik |
DNK ekstraktlari | 1-1,5 mkg | > 20 ng/ml | OD260/280= 1,6-2,5 |
Atrof-muhit namunalari uchun:
Namuna turi | Tavsiya etilgan namuna olish tartibi |
Tuproq | Namuna miqdori: taxminan.5 g;Qolgan qurigan moddani sirtdan olib tashlash kerak;Katta bo'laklarni maydalang va 2 mm filtrdan o'ting;Saqlash uchun steril EP-naycha yoki cyrotubedagi alikot namunalari. |
Najas | Namuna miqdori: taxminan.5 g;Namunalarni bron qilish uchun steril EP-naycha yoki kriotubeda to'plang va alikot qiling. |
Ichak tarkibi | Namunalar aseptik sharoitda qayta ishlanishi kerak.Yig'ilgan to'qimalarni PBS bilan yuving;PBSni santrifüj qiling va cho'kmani EP-naychalarga to'plang. |
Loy | Namuna miqdori: taxminan.5 g;Loy namunasini zahiraga olish uchun steril EP-naycha yoki kriotubeda to'plang va alikotlang. |
Suv havzasi | Miqdori cheklangan mikroorganizmlarga ega boʻlgan namuna uchun, masalan, vodoprovod suvi, quduq suvi va boshqalar, kamida 1 litr suv toʻplang va membranadagi mikroblarni boyitish uchun 0,22 mkm filtrdan oʻtkazing.Membranani steril naychada saqlang. |
Teri | Teri yuzasini steril paxta tampon yoki jarrohlik pichoq bilan ehtiyotkorlik bilan qirib tashlang va uni steril naychaga joylashtiring. |
Namunalarni suyuq azotda 3-4 soat davomida muzlatib qo'ying va suyuq azotda yoki -80 darajadan uzoq muddatli saqlash uchun saqlang.Quruq muz bilan namuna jo'natish talab qilinadi.
1.Issiqlik xaritasi: Turlarning boyligini klasterlash2.KEGG metabolik yo'llariga izohlangan funktsional genlar3.Turlar korrelyatsion tarmoq4.CARD antibiotiklarga qarshilik genlarining sirkolari
BMK ishi
Nanopor metagenomikasi pastki nafas yo'llarining bakterial infektsiyasini tez klinik tashxislash imkonini beradi
Nashr etilgan:Tabiat biotexnologiyasi, 2019
Texnik diqqatga sazovor joylar
Sekvensiya: Nanopore MinION
Klinik metagenomik bioinformatika: Xost DNKning yo'qolishi, WIMP va ARMA tahlili
Tez aniqlash: 6 soat
Yuqori sezuvchanlik: 96,6%
Asosiy natijalar
2006 yilda pastki nafas yo'llarining infektsiyasi (LR) dunyo bo'ylab 3 million odamning o'limiga sabab bo'ldi.LR1 qo'zg'atuvchisini aniqlashning odatiy usuli - bu kultivatsiya bo'lib, uning sezgirligi past, aylanish muddati uzoq va erta antibiotik terapiyasi bo'yicha ko'rsatmalar yo'q.Tez va aniq mikrob diagnostikasi uzoq vaqtdan beri shoshilinch ehtiyoj bo'lib kelgan.Sharqiy Angliya universitetidan doktor Jastin va uning hamkorlari patogenni aniqlash uchun Nanoporga asoslangan metagenomik usulni muvaffaqiyatli ishlab chiqdilar.Ularning ish jarayoniga ko'ra, mezbon DNKning 99,99 foizi tugashi mumkin.Patogenlar va antibiotiklarga chidamli genlarni aniqlash 6 soat ichida yakunlanishi mumkin.
Malumot
Charalampous, T., Kay, GL, Richardson, H., Aydin, A., & O'Grady, J..(2019).Nanopor metagenomikasi pastki nafas yo'llarining bakterial infektsiyasini tez klinik tashxislash imkonini beradi.Tabiat biotexnologiyasi, 37(7), 1.