Çekirdeklerin izolasyonu, çift geçişli sekiz kanallı mikroakışkan sisteminden oluşan 10x Genomics ChromiumTM ile sağlanır.Bu sistemde barkodlu ve primerli bir jel boncuk, enzimler ve tek bir çekirdek nanolitre büyüklüğündeki yağ damlası içinde kapsüllenerek Emülsiyon İçinde Jel Boncuk (GEM) üretilir.GEM oluşturulduktan sonra, her GEM'de hücre lizizi ve barkodların serbest bırakılması gerçekleştirilir.mRNA, 10x barkod ve UMI ile cDNA moleküllerine ters kopyalanır ve bunlar ayrıca standart sıralama kütüphanesi yapısına tabidir.
Hücre / Doku | Sebep |
Taze donmuş dokuyu tazeleyin | Yeni veya uzun süredir kaydedilmiş organizasyonlar alınamıyor |
Kas hücresi, Megakaryosit, Yağ… | Hücre çapı cihaza girilemeyecek kadar büyük |
Karaciğer… | Kırılamayacak kadar kırılgan, tek hücreleri ayırt edemiyoruz |
Nöron hücresi, Beyin… | Daha hassas, vurgulanması kolay, sıralama sonuçlarını değiştirecek |
Pankreas, Tiroid… | Tek hücre süspansiyonunun üretimini etkileyen endojen enzimler açısından zengin |
Tek çekirdekli | Tek hücreli |
Sınırsız hücre çapı | Hücre çapı: 10-40 μm |
Malzeme donmuş doku olabilir | Malzeme taze doku olmalıdır |
Dondurulmuş hücrelerin düşük stresi | Enzim tedavisi hücre stres reaksiyonuna neden olabilir |
Kırmızı kan hücrelerinin çıkarılmasına gerek yoktur | Kırmızı kan hücrelerinin çıkarılması gerekiyor |
Nükleer biyobilgiyi ifade eder | Tüm hücre biyobilgiyi ifade eder |
Kütüphane | Sıralama stratejisi | Veri Hacmi | Örnek Gereksinimler | Doku |
10× Genomik tek çekirdek kütüphanesi | 10x Genomik -Illumina PE150 | Yaklaşık 100.000 okuma/hücre.100-200 GB | Hücre numarası: >2× 105 Hücre konsantrasyonu700-1.200 hücre/μL'de | ≥ 200 mg |
Numune hazırlama kılavuzu ve hizmet iş akışı hakkında daha fazla ayrıntı için lütfen bir uzmanla konuşmaktan çekinmeyin.BMKGENE uzmanı
1.Nokta kümeleme
2.Marker ifadesi bolluğu kümeleme ısı haritası
3.Farklı kümelerdeki yapıcı gen dağılımı
4.Hücre yörünge analizi/sahte zaman