Ang mRNA sequencing ay gumagamit ng next-generation sequencing technique (NGS) para makuha ang messenger RNA(mRNA) form na Eukaryote sa partikular na panahon kung saan ina-activate ang ilang espesyal na function.Ang pinakamahabang transcript spliced ay tinawag na 'Unigene' at ginamit bilang reference sequence para sa kasunod na pagsusuri, na isang epektibong paraan upang pag-aralan ang molekular na mekanismo at regulatory network ng mga species nang walang reference.
Pagkatapos ng transcriptome data assembly at unigene functional annotation
(1)SNP analysis, SSR analysis, CDS prediction at gene structure ay preformed.
(2) Isasagawa ang quantification ng unigene expression sa bawat sample.
(3) Matutuklasan ang pagkakaiba-iba na ipinahayag na mga unigene sa pagitan ng mga sample (o grupo) batay sa unigene expression
(4) Isasagawa ang clustering, functional annotation at enrichment analysis ng differentially expressed unigenes