Ang paghihiwalay ng nuclei ay nakakamit ng 10× Genomics ChromiumTM, na binubuo ng eight-channel microfluidics system na may double crossings.Sa sistemang ito, ang isang gel bead na may mga barcode at primer, mga enzyme at isang solong nucleus ay naka-encapsulated sa nanoliter-sized na patak ng langis, na bumubuo ng Gel Bead-in-Emulsion (GEM).Kapag nabuo ang GEM, ang cell lysis at paglabas ng mga barcode ay isinasagawa sa bawat GEM.Ang mRNA ay na-reverse na na-transcribe sa mga molekula ng cDNA na may 10x na mga barcode at UMI, na higit pang napapailalim sa karaniwang pagkakasunud-sunod na pagtatayo ng library.
Cell / Tissue | Dahilan |
Alisin ang sariwang frozen na tissue | Hindi makakuha ng bago o matagal nang na-save na mga organisasyon |
Muscle cell, Megakaryocyte, Fat… | Ang diameter ng cell ay masyadong malaki upang makapasok sa instrumento |
Atay… | Masyadong marupok upang masira, hindi matukoy ang mga solong selula |
Neuron cell, Utak... | Ang mas sensitibo, madaling ma-stress, ay magbabago sa mga resulta ng pagkakasunud-sunod |
Pancreas, Thyroid… | Mayaman sa endogenous enzymes, na nakakaapekto sa produksyon ng solong cell suspension |
Single-nucleus | Isang cell |
Walang limitasyong diameter ng cell | Diametro ng cell: 10-40 μm |
Ang materyal ay maaaring frozen na tissue | Ang materyal ay dapat na sariwang tissue |
Mababang stress ng frozen na mga cell | Ang paggamot sa enzyme ay maaaring maging sanhi ng reaksyon ng stress ng cell |
Walang mga pulang selula ng dugo na kailangang alisin | Kailangang alisin ang mga pulang selula ng dugo |
Ang nuklear ay nagpapahayag ng bioinformation | Ang buong cell ay nagpapahayag ng bioinformation |
Aklatan | Diskarte sa pagkakasunud-sunod | Dami ng Data | Mga Sample na Kinakailangan | Tissue |
10× Genomics single-nuclei library | 10x Genomics -Illumina PE150 | 100,000 reads/cell approx.100-200 Gb | Numero ng cell: >2× 105 Cell conc.sa 700-1,200 cell/μL | ≥ 200 mg |
Para sa higit pang mga detalye sa gabay sa paghahanda ng sample at daloy ng trabaho sa serbisyo, mangyaring huwag mag-atubiling makipag-usap sa aDalubhasa sa BMKGENE
1.Spot clustering
2.Heatmap ng clustering ng clustering ng kasaganaan ng expression ng marker
3.Maker gene distribution sa iba't ibang cluster
4.Cell trajectory analysis/pseudotime