● Isolation at cultivation-free para sa microbial community profiling
● Mataas na resolution sa pag-detect ng mababang-saganang species sa mga sample ng kapaligiran
● Ang ideya ng "meta-" ay isinasama ang lahat ng biological features sa functional level, species level at gene level, na nagpapakita ng dynamic na view na mas malapit sa realidad.
● Nag-iipon ang BMK ng napakalaking karanasan sa magkakaibang uri ng sample na may mahigit 10,000 sample na naproseso.
Platform | Pagsusunod-sunod | Inirerekomendang data | Oras ng turnaround |
Plataporma ng Illumina NovaSeq | PE150 | 6 G/10 G/20 G | 45 araw ng trabaho |
● Kontrol sa kalidad ng raw data
● Metagenome assembly
● Non-redundant gene set at anotasyon
● Pagsusuri ng pagkakaiba-iba ng mga species
● Pagsusuri ng pagkakaiba-iba ng genetic function
● Pagsusuri sa pagitan ng pangkat
● Pagsusuri ng asosasyon laban sa mga pang-eksperimentong salik
Para saMga extract ng DNA:
Uri ng Sample | Halaga | Konsentrasyon | Kadalisayan |
Mga extract ng DNA | > 30 ng | > 1 ng/μl | OD260/280= 1.6-2.5 |
Para sa mga sample ng kapaligiran:
Uri ng sample | Inirerekomendang pamamaraan ng sampling |
Lupa | Sampling amount: approx.5 g;Ang natitirang lantang sangkap ay kailangang alisin sa ibabaw;Gumiling ng malalaking piraso at dumaan sa 2 mm na filter;Aliquot sample sa sterile EP-tube o cyrotube para sa reservation. |
Mga dumi | Sampling amount: approx.5 g;Kolektahin at aliquot ang mga sample sa sterile EP-tube o cryotube para sa reserbasyon. |
Mga nilalaman ng bituka | Ang mga sample ay kailangang iproseso sa ilalim ng kondisyong aseptiko.Hugasan ang nakolektang tissue gamit ang PBS;I-centrifuge ang PBS at kolektahin ang precipitant sa EP-tubes. |
Putik | Sampling amount: approx.5 g;Kolektahin at aliquot ang sample ng putik sa sterile EP-tube o cryotube para sa reserbasyon |
Katawan ng tubig | Para sa sample na may limitadong dami ng microbial, tulad ng tubig sa gripo, tubig ng balon, atbp., Mangolekta ng hindi bababa sa 1 L na tubig at dumaan sa 0.22 μm na filter upang pagyamanin ang microbial sa lamad.Itago ang lamad sa sterile tube. |
Balat | Maingat na simutin ang ibabaw ng balat gamit ang sterile cotton swab o surgical blade at ilagay ito sa sterile tube. |
I-freeze ang mga sample sa liquid nitrogen sa loob ng 3-4 na oras at iimbak sa liquid nitrogen o -80 degree hanggang sa pangmatagalang reserbasyon.Kinakailangan ang sample na pagpapadala gamit ang dry-ice.
1.Histogram: Pamamahagi ng mga species
2. Mga functional na gene na naka-annotate sa KEGG metabolic pathways
3. Heat map: Mga differential na function batay sa relatibong kasaganaan ng gene4.Circos ng CARD antibiotic resistance genes
Kaso ng BMK
Paglaganap ng mga gene na lumalaban sa antibiotic at bacterial pathogens sa kahabaan ng soil-mangrove root continuum
Nai-publish:Journal of Hazardous Materials, 2021
Diskarte sa pagkakasunud-sunod:
Mga Materyal: Mga extract ng DNA ng apat na fragment ng mga sample na nauugnay sa ugat ng bakawan: hindi nakatanim na lupa, rhizosphere, episphere at endosphere compartments
Platform: Illumina HiSeq 2500
Mga Target: Metagenome
16S rRNA gene V3-V4 rehiyon
Mga pangunahing resulta
Ang metagenomic sequencing at metabarcoding profiling sa soil-root continuum ng mangrove saplings ay naproseso upang mapag-aralan ang dissemination ng antibiotic resistance genes (ARGs) mula sa lupa patungo sa mga halaman.Ang metagenomic data ay nagsiwalat na 91.4% ng mga antibiotic resistance genes ay karaniwang nakikilala sa lahat ng apat na compartment ng lupa na binanggit sa itaas, na nagpakita ng tuluy-tuloy na paraan.Ang 16S rRNA amplicon sequencing ay nakabuo ng 29,285 sequence, na kumakatawan sa 346 species.Ang pagsasama-sama sa pag-profile ng mga species sa pamamagitan ng pagkakasunud-sunod ng amplicon, ang pagpapakalat na ito ay natagpuan na independyente sa microbiota na nauugnay sa ugat, gayunpaman, maaari itong mapadali ng mobile ng mga genetic na elemento.Tinukoy ng pag-aaral na ito ang daloy ng mga ARG at pathogen mula sa lupa patungo sa mga halaman sa pamamagitan ng magkakaugnay na soil-root continuum.
Sanggunian
Wang, C. , Hu, R. , Strong, PJ , Zhuang, W. , & Shu, L. .(2020).Paglaganap ng mga gene na lumalaban sa antibiotic at bacterial pathogens sa kahabaan ng soil–mangrove root continuum.Journal ng Mapanganib na Materyal, 408, 124985.