Sequencing Mode | Laki ng Aklatan | Teoretikal na DatosYield (Per Cell) | Single-baseKatumpakan | Mga aplikasyon |
CLR | 20Kb, 30Kb, atbp. | 80 Gb hanggang 130 Gb | Tinatayang85% | De novo, SV na pagtawag, atbp. |
CCS | 15-20 Kb | 14 hanggang 40 Gb/Cell (Sequel II) 70 hanggang 110 Gb/Cell (Revio) Depende sa mga sample | Tinatayang99% | De novo, pagtawag sa SNP/Indel/SV, Iso-Seq, |
Mga tuntunin | Sistema ng Sequel II | Sistema ng Revio | Taasan |
Mas mataas na density | 8 milyong ZMW | 25 milyong ZMW | 3x |
Mga independiyenteng yugto | 1 | 4 | 4x |
Mas maikling mga oras ng pagtakbo | 30 oras | 24 na oras | 1.25x |
30X HiFi genome ng tao / taon | 88 | 1,300 | 15x sa pangkalahatan |
● Higit sa 8 taong karanasan sa PacBio sequencing platform na may libu-libong saradong proyekto na may iba't ibang species.
● Ganap na nilagyan ng pinakabagong mga platform ng PacBio Sequencing, Revio upang magarantiya ang sapat na sequencing throughput.
● Mas mabilis na turn-around time, mas mataas na data yield at mas tumpak na data.
● Nag-ambag sa daan-daang mga publikasyong nakabatay sa PacBio na may mataas na epekto.
Uri ng Sample | Halaga | Konsentrasyon (Qubit®) | Dami | Kadalisayan | Ang iba |
Genomic DNA | Depende sa Data Requirement | ≥50 ng/μl | ≥15μl | OD260/280=1.7-2.2; OD260/230=1.8-2.5; Maaliwalas na peak sa 260 nm,walang mga kontaminasyon | Kailangang sukatin ang konsentrasyon ng Qubit at Qubit/Nanopore = 0.8-2.5 |
Kabuuang RNA | ≥1.2μg | ≥120 ng/μl | ≥15μl | OD260/280=1.7-2.5; OD260/230=0.5-2.5;walang mga kontaminasyon | Halaga ng RIN ≥7.5 5≥28S/18S≥1 |
1.In-house na Data Yield
Nabuo ang data mula sa 63 CCS cell (mula sa 26 na species)
DATA-PacBio-CCS-15 Kb | Karaniwan | Max | Min | Median |
Yield - mga subread (Gb) | 421.12 | 544.27 | 221.38 | 426.58 |
Yiled - CCS(Gb) | 25.93 | 38.59 | 10.86 | 25.43 |
Polymerase N50 | 145,651 | 175,430 | 118,118 | 144,689 |
Mga subread na N50 | 17,509 | 23,924 | 12,485 | 17,584 |
CCS N50 | 14,490 | 19,034 | 9,876 | 14,747 |
Average na haba-Polymerase | 67,995 | 89,379 | 49,664 | 66,433 |
Average na haba-Mga Subread | 15,866 | 21,036 | 11,657 | 16,012 |
Average na haba-CCS | 14,489 | 19,074 | 8,575 | 14,655 |
Nabuo ang data mula sa 16 na CLR cell (mula sa 76 na species)
DATA-PacBio-CLR-30Kb | Karaniwan | Max | Min | Median |
Yield - mga subread (Gb) | 142.20 | 291.40 | 50.55 | 142.49 |
Polymerase N50 | 39,456 | 121,191 | 15,389 | 35,231 |
Mga subread na N50 | 28,490 | 41,012 | 14,430 | 29,063 |
Average na haba-Polymerase | 22,063 | 48,886 | 8,747 | 21,555 |
Average na haba-Mga Subread | 17,720 | 27,225 | 8,293 | 17,779 |
2.Data QC – DemoMga istatistika sa ani ng data
Sample | Binabasa ng ccs ang Num | Kabuuang ccs Base (bp) | ccs Reads N50 (bp) | ccs Mean Length (bp) | ccs Pinakamahabang Nabasa (bp) | Mga subread na Base (bp) | ccs rate(%) |
PB_BMKxxx | 3,444,159 | 54,164,122,586 | 15,728 | 15,726 | 36,110 | 863,326,330,465 | 6.27 |