Izolimi i bërthamave arrihet nga 10× Genomics ChromiumTM, i cili përbëhet nga një sistem mikrofluidik me tetë kanale me kryqëzime të dyfishta.Në këtë sistem, një rruaza xhel me barkode dhe primer, enzima dhe një bërthamë e vetme janë të kapsuluara në pikë vaji me madhësi nanolitri, duke gjeneruar Gel Bead-in-Emulsion (GEM).Pasi të formohet GEM, liza e qelizave dhe lirimi i barkodeve kryhen në çdo GEM.mRNA transkriptohen në mënyrë të kundërt në molekula cDNA me barkode 10× dhe UMI, të cilat më tej i nënshtrohen ndërtimit të bibliotekës standarde të sekuencës.
Qelizë / Ind | Arsyeja |
Pafreskoni indet e ngrira | Nuk mund të merrni organizata të freskëta ose të ruajtura prej kohësh |
Qeliza muskulore, megakariocitet, yndyra… | Diametri i qelizës është shumë i madh për të hyrë në instrument |
Mëlçia… | Shumë e brishtë për t'u thyer, e paaftë për të dalluar qelizat e vetme |
Qeliza neurone, truri… | Më e ndjeshme, e lehtë për t'u stresuar, do të ndryshojë rezultatet e renditjes |
Pankreasi, tiroidja… | I pasur me enzima endogjene, që ndikojnë në prodhimin e suspensionit njëqelizor |
Një bërthamë | Njëqelizore |
Diametri i pakufizuar i qelizave | Diametri i qelizës: 10-40 μm |
Materiali mund të jetë ind i ngrirë | Materiali duhet të jetë ind i freskët |
Stresi i ulët i qelizave të ngrira | Trajtimi me enzimë mund të shkaktojë reaksion të stresit të qelizave |
Nuk ka nevojë të hiqet qelizat e kuqe të gjakut | Qelizat e kuqe të gjakut duhet të hiqen |
Bërthamore shpreh bioinformacion | E gjithë qeliza shpreh bioinformacion |
Librari | Strategjia e renditjes | Vëllimi i të dhënave | Kërkesat e mostrës | Indi |
10× Biblioteka me një bërthamë të Genomics | 10x Genomics -Illumina PE150 | 100,000 lexime/qelizë përafërsisht.100-200 Gb | Numri i celularit: >2×105 Përmbledhje qelize.në 700-1200 qeliza/μL | ≥ 200 mg |
Për më shumë detaje mbi udhëzimet për përgatitjen e mostrës dhe rrjedhën e punës së shërbimit, ju lutemi mos ngurroni të flisni me aekspert BMKGENE
1.Grumbullimi i pikave
2. Harta e nxehtësisë e grupimit të bollëkut të shprehjes së shënuesit
3.Shpërndarja e gjeneve krijues në grupime të ndryshme
4.Analiza e trajektores qelizore/pseudokohe