ਪੂਰੀ ਜੀਨੋਮ ਰੀਸੀਕੁਏਂਸਿੰਗ
ਚੀਨੀ ਆਬਾਦੀ ਵਿੱਚ ਬਣਤਰ ਦੇ ਰੂਪ ਅਤੇ ਫੀਨੋਟਾਈਪਾਂ, ਬਿਮਾਰੀਆਂ ਅਤੇ ਆਬਾਦੀ ਦੇ ਅਨੁਕੂਲਨ 'ਤੇ ਉਨ੍ਹਾਂ ਦਾ ਪ੍ਰਭਾਵ
ਨੈਨੋਪੋਰ |PacBio |ਪੂਰਾ ਜੀਨੋਮ ਮੁੜ-ਕ੍ਰਮ |ਢਾਂਚਾਗਤ ਪਰਿਵਰਤਨ ਕਾਲਿੰਗ
ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਬਾਇਓਮਾਰਕਰ ਟੈਕਨੋਲੋਜੀਜ਼ ਦੁਆਰਾ ਨੈਨੋਪੋਰ ਪ੍ਰੋਮੇਥੀਓਨ ਕ੍ਰਮ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਹਾਈਲਾਈਟਸ
ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਮਨੁੱਖੀ ਜੀਨੋਮ ਵਿੱਚ ਸੰਰਚਨਾਤਮਕ ਭਿੰਨਤਾਵਾਂ (SVs) ਦਾ ਇੱਕ ਸਮੁੱਚਾ ਲੈਂਡਸਕੇਪ Nanopore PromethION ਪਲੇਟਫਾਰਮ 'ਤੇ ਲੰਬੇ-ਪੜ੍ਹੇ ਗਏ ਕ੍ਰਮ ਦੀ ਮਦਦ ਨਾਲ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜੋ ਕਿ ਫੀਨੋਟਾਈਪਾਂ, ਬਿਮਾਰੀਆਂ ਅਤੇ ਵਿਕਾਸ ਵਿੱਚ SVs ਦੀ ਸਮਝ ਨੂੰ ਡੂੰਘਾ ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਡਿਜ਼ਾਈਨ
ਨਮੂਨੇ: 68 ਫੀਨੋਟਾਈਪਿਕ ਅਤੇ ਕਲੀਨਿਕਲ ਮਾਪਾਂ ਦੇ ਨਾਲ 405 ਗੈਰ-ਸੰਬੰਧਿਤ ਚੀਨੀ ਵਿਅਕਤੀਆਂ (206 ਪੁਰਸ਼ ਅਤੇ 199 ਔਰਤਾਂ) ਦੇ ਪੈਰੀਫਿਰਲ ਖੂਨ ਦੇ ਲਿਊਕੋਸਾਈਟਸ।ਸਾਰੇ ਵਿਅਕਤੀਆਂ ਵਿੱਚ, 124 ਵਿਅਕਤੀਆਂ ਦੇ ਜੱਦੀ ਖੇਤਰ ਉੱਤਰ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਾਂਤ ਸਨ, 198 ਵਿਅਕਤੀਆਂ ਵਿੱਚੋਂ ਉਹ ਦੱਖਣ ਸਨ, 53 ਦੱਖਣ-ਪੱਛਮੀ ਸਨ ਅਤੇ 30 ਅਣਜਾਣ ਸਨ।
ਸੀਕੁਏਂਸਿੰਗ ਰਣਨੀਤੀ: ਨੈਨੋਪੋਰ 1D ਰੀਡਸ ਅਤੇ ਪੈਕਬੀਓ ਹਾਈਫਾਈ ਰੀਡਸ ਦੇ ਨਾਲ ਪੂਰਾ ਜੀਨੋਮ ਲਾਂਗ-ਰੀਡ ਸੀਕੁਏਂਸਿੰਗ (LRS)।
ਸੀਕੁਏਂਸਿੰਗ ਪਲੇਟਫਾਰਮ: ਨੈਨੋਪੋਰ ਪ੍ਰੋਮੇਥੀਅਨ;PacBio ਸੀਕਵਲ II
ਢਾਂਚਾ ਪਰਿਵਰਤਨ ਕਾਲਿੰਗ
ਚਿੱਤਰ 1. SV ਕਾਲਿੰਗ ਅਤੇ ਫਿਲਟਰਿੰਗ ਦਾ ਵਰਕਫਲੋ
ਮੁੱਖ ਪ੍ਰਾਪਤੀਆਂ
ਢਾਂਚਾ ਪਰਿਵਰਤਨ ਖੋਜ ਅਤੇ ਪ੍ਰਮਾਣਿਕਤਾ
ਨੈਨੋਪੋਰ ਡੇਟਸੈੱਟ: ਪ੍ਰੋਮੇਥੀਓਨ ਸੀਕੁਏਂਸਿੰਗ ਪਲੇਟਫਾਰਮ 'ਤੇ ਕੁੱਲ 20.7 Tb ਕਲੀਨ ਰੀਡ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ, ਪ੍ਰਤੀ ਨਮੂਨਾ ਔਸਤਨ 51 Gb ਡਾਟਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਲਗਭਗ।ਡੂੰਘਾਈ ਵਿੱਚ 17 ਗੁਣਾ।
ਹਵਾਲਾ ਜੀਨੋਮ ਅਲਾਈਨਮੈਂਟ (GRCh38): 94.1% ਦੀ ਔਸਤ ਮੈਪਿੰਗ ਦਰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਔਸਤ ਗਲਤੀ ਦਰ (12.6%) ਇੱਕ ਪੁਰਾਣੇ ਬੈਂਚਮਾਰਕਿੰਗ ਅਧਿਐਨ (12.6%) ਦੇ ਸਮਾਨ ਸੀ (ਚਿੱਤਰ 2b ਅਤੇ 2c)
ਢਾਂਚਾ ਪਰਿਵਰਤਨ (SV) ਕਾਲਿੰਗ: ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਲਾਗੂ ਕੀਤੇ ਗਏ SV ਕਾਲਰਾਂ ਵਿੱਚ Sniffles, NanoVar ਅਤੇ NanoSV ਸ਼ਾਮਲ ਸਨ।ਉੱਚ-ਵਿਸ਼ਵਾਸ ਵਾਲੇ SVs ਨੂੰ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ ਦੋ ਕਾਲਰਾਂ ਦੁਆਰਾ ਪਛਾਣੇ ਗਏ SVs ਵਜੋਂ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਡੂੰਘਾਈ, ਲੰਬਾਈ ਅਤੇ ਖੇਤਰ 'ਤੇ ਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਪਾਸ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।
ਹਰੇਕ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਔਸਤਨ 18,489 (15,439 ਤੋਂ 22,505 ਤੱਕ) ਉੱਚ-ਵਿਸ਼ਵਾਸ ਵਾਲੇ SVs ਦੀ ਪਛਾਣ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।(ਚਿੱਤਰ 2d, 2e ਅਤੇ 2f)
ਚਿੱਤਰ 2. ਨੈਨੋਪੋਰ ਡੇਟਾਸੈਟ ਦੁਆਰਾ ਪਛਾਣੇ ਗਏ SVs ਦਾ ਸਮੁੱਚਾ ਲੈਂਡਸਕੇਪ
PacBio ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਮਾਣਿਕਤਾ: ਇੱਕ ਨਮੂਨੇ (HG002, ਬੱਚੇ) ਵਿੱਚ ਪਛਾਣੇ ਗਏ SVs ਨੂੰ ਇੱਕ PacBio HiFi ਡੇਟਾਸੈਟ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਮਾਣਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਸਮੁੱਚੀ ਝੂਠੀ ਖੋਜ ਦਰ (FDR) 3.2% ਸੀ, ਜੋ ਕਿ ਨੈਨੋਪੋਰ ਰੀਡਜ਼ ਦੁਆਰਾ ਮੁਕਾਬਲਤਨ ਭਰੋਸੇਮੰਦ SV ਪਛਾਣ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਹੈ।
ਗੈਰ-ਰਹਿਤ SVs ਅਤੇ ਜੀਨੋਮਿਕ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ
ਗੈਰ-ਰਿਡੰਡੈਂਟ SVs: ਸਾਰੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ SVs ਨੂੰ ਮਿਲਾ ਕੇ 132,312 ਗੈਰ-ਰਿਡੰਡੈਂਟ SVs ਦਾ ਇੱਕ ਸੈੱਟ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ 67,405 DELs, 60,182 INSs, 3,956 DUPs ਅਤੇ 769 INVs ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।(ਚਿੱਤਰ 3a)
ਮੌਜੂਦ SV ਡੇਟਾਸੈਟਾਂ ਨਾਲ ਤੁਲਨਾ: ਇਸ ਡੇਟਾਸੈਟ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ਿਤ TGS ਜਾਂ NGS ਡੇਟਾਸੈਟ ਨਾਲ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਚਾਰ ਡਾਟਾਸੈਟਾਂ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ, LRS15, ਜੋ ਕਿ ਲੰਬੇ-ਪੜ੍ਹੇ ਸੀਕੁਏਂਸਿੰਗ ਪਲੇਟਫਾਰਮ (PacBio) ਤੋਂ ਇੱਕਮਾਤਰ ਡੇਟਾਸੈਟ ਵੀ ਹੈ, ਨੇ ਇਸ ਡੇਟਾਸੈਟ ਨਾਲ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਡੇ ਓਵਰਲੈਪ ਸਾਂਝੇ ਕੀਤੇ ਹਨ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਇਸ ਡੇਟਾਸੈਟ ਵਿੱਚ 53.3% (70,471) SVs ਪਹਿਲੀ ਵਾਰ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।ਹਰੇਕ SV ਕਿਸਮ ਨੂੰ ਦੇਖ ਕੇ, ਲੰਬੇ-ਪੜ੍ਹੇ ਗਏ ਕ੍ਰਮਬੱਧ ਡੇਟਾਸੇਟ ਦੇ ਨਾਲ ਬਰਾਮਦ ਕੀਤੇ INSs ਦੀ ਸੰਖਿਆ ਬਾਕੀ ਛੋਟੇ-ਪੜ੍ਹੇ ਲੋਕਾਂ ਨਾਲੋਂ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸੀ, ਇਹ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਹੈ ਕਿ ਲੰਬੇ-ਪੜ੍ਹੇ ਗਏ ਕ੍ਰਮ INSs ਖੋਜ ਵਿੱਚ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਕੁਸ਼ਲ ਹੈ।(ਚਿੱਤਰ 3b ਅਤੇ 3c)
ਚਿੱਤਰ 3. ਹਰੇਕ SV ਕਿਸਮ ਲਈ ਗੈਰ-ਰਿਡੰਡੈਂਟ SV ਦੇ ਗੁਣ
ਜੀਨੋਮਿਕ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ: SVs ਦੀ ਸੰਖਿਆ ਕ੍ਰੋਮੋਸੋਮ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਨਾਲ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸਬੰਧਿਤ ਪਾਈ ਗਈ ਸੀ।ਜੀਨਾਂ ਦੀ ਵੰਡ, ਦੁਹਰਾਓ, DELs (ਹਰਾ), INS (ਨੀਲਾ), DUP (ਪੀਲਾ) ਅਤੇ INV (ਨਾਰੰਗੀ) ਇੱਕ ਸਰਕੋਸ ਚਿੱਤਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿੱਥੇ ਕ੍ਰੋਮੋਸੋਮ ਹਥਿਆਰਾਂ ਦੇ ਅੰਤ ਵਿੱਚ SV ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਆਮ ਵਾਧਾ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।(ਚਿੱਤਰ 3d ਅਤੇ 3e)
SVs ਦੀ ਲੰਬਾਈ: INSs ਅਤੇ DELs ਦੀ ਲੰਬਾਈ DUPs ਅਤੇ INVs ਨਾਲੋਂ ਕਾਫ਼ੀ ਘੱਟ ਪਾਈ ਗਈ ਸੀ, ਜੋ PacBio HiFi ਡੇਟਾਸੇਟ ਦੁਆਰਾ ਪਛਾਣੇ ਗਏ ਲੋਕਾਂ ਨਾਲ ਸਹਿਮਤ ਸਨ।ਸਾਰੇ ਪਛਾਣੇ ਗਏ SVs ਦੀ ਲੰਬਾਈ 395.6 Mb ਤੱਕ ਜੋੜੀ ਗਈ ਹੈ, ਜਿਸ ਨੇ ਸਮੁੱਚੇ ਮਨੁੱਖੀ ਜੀਨੋਮ ਦੇ 13.2% ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤਾ ਹੈ।SVs ਨੇ ਔਸਤਨ ਪ੍ਰਤੀ ਵਿਅਕਤੀ ਜੀਨੋਮ ਦੇ 23.0 Mb (ਲਗਭਗ 0.8%) ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕੀਤਾ।(ਚਿੱਤਰ 3f ਅਤੇ 3g)
SVs ਦੇ ਕਾਰਜਾਤਮਕ, ਫੈਨੋਟਾਇਪਿਕ ਅਤੇ ਕਲੀਨਿਕਲ ਪ੍ਰਭਾਵ
ਫੰਕਸ਼ਨ (pLoF) SVs ਦਾ ਅਨੁਮਾਨਿਤ ਨੁਕਸਾਨ: pLoF SVs ਨੂੰ CDS ਨਾਲ ਇੰਟਰੈਕਟ ਕੀਤੇ SVs ਵਜੋਂ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿੱਥੇ ਕੋਡਿੰਗ ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡਸ ਨੂੰ ਮਿਟਾ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਾਂ ORF ਨੂੰ ਬਦਲਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਕੁੱਲ 1,681 ਜੀਨਾਂ ਦੇ CDS ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਨ ਵਾਲੇ 1,929 pLoF SVs ਨੂੰ ਐਨੋਟੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਅੰਦਰ, 38 ਜੀਨਾਂ ਨੇ GO ਸੰਸ਼ੋਧਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵਿੱਚ "ਇਮਯੂਨੋਗਲੋਬੂਲਿਨ ਰੀਸੈਪਟਰ ਬਾਈਡਿੰਗ" ਨੂੰ ਉਜਾਗਰ ਕੀਤਾ।ਇਹ pLoF SVs ਨੂੰ ਕ੍ਰਮਵਾਰ GWAS, OMIM ਅਤੇ COSMIC ਦੁਆਰਾ ਅੱਗੇ ਐਨੋਟੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।(ਚਿੱਤਰ 4a ਅਤੇ 4b)
ਫੈਨੋਟਾਈਪਿਕ ਅਤੇ ਡਾਕਟਰੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੰਬੰਧਿਤ SVs: ਨੈਨੋਪੋਰ ਡੇਟਾਸੈਟ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ SV ਨੂੰ ਫੈਨੋਟਾਈਪਿਕ ਅਤੇ ਕਲੀਨਿਕਲ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।19.3 kb ਦਾ ਇੱਕ ਦੁਰਲੱਭ ਹੇਟਰੋਜ਼ਾਈਗਸ DEL, ਜੋ ਕਿ ਅਲਫ਼ਾ-ਥੈਲੇਸੀਮੀਆ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦਾ ਹੈ, ਦੀ ਪਛਾਣ ਤਿੰਨ ਵਿਅਕਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਜੋ ਹੀਮੋਗਲੋਬਿਨ ਸਬਯੂਨਿਟ ਅਲਫ਼ਾ 1 ਅਤੇ 2 (HBA1 ਅਤੇ HBA2) ਦੇ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਕੰਮ ਨਹੀਂ ਕਰਦੇ ਸਨ।ਜੀਨ ਕੋਡਿੰਗ ਹੀਮੋਗਲੋਬਿਨ ਸਬਯੂਨਿਟ ਬੀਟਾ (HBB) 'ਤੇ 27.4 kb ਦਾ ਇੱਕ ਹੋਰ DEL ਇੱਕ ਹੋਰ ਵਿਅਕਤੀ ਵਿੱਚ ਪਛਾਣਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਇਹ SV ਗੰਭੀਰ ਹੀਮੋਗਲੋਬਿਨੋਪੈਥੀ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦਾ ਸੀ।(ਚਿੱਤਰ 4c)
ਚਿੱਤਰ 4. ਫਿਨੋਟਾਈਪਸ ਅਤੇ ਬਿਮਾਰੀਆਂ ਨਾਲ ਸਬੰਧਿਤ pLoF SVs
35 ਹੋਮੋਜ਼ਾਈਗਸ ਅਤੇ 67 ਹੇਟਰੋਜ਼ਾਈਗਸ ਕੈਰੀਅਰਾਂ ਵਿੱਚ 2.4 kb ਦਾ ਇੱਕ ਸਾਂਝਾ DEL ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਜੋ ਗਰੋਥ ਹੋਮੋਨ ਰੀਸੈਪਟਰ (GHR) ਦੇ ਤੀਜੇ ਐਕਸੋਨ ਦੇ ਪੂਰੇ ਖੇਤਰ ਨੂੰ ਕਵਰ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਹੋਮੋਜ਼ਾਈਗਸ ਕੈਰੀਅਰ ਹੇਟਰਜ਼ਾਈਗਸ (ਪੀ = 0.033) ਨਾਲੋਂ ਕਾਫ਼ੀ ਛੋਟੇ ਪਾਏ ਗਏ ਸਨ।(ਚਿੱਤਰ 4d)
ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਇਹਨਾਂ SVs ਨੂੰ ਦੋ ਖੇਤਰੀ ਸਮੂਹਾਂ: ਉੱਤਰੀ ਅਤੇ ਦੱਖਣੀ ਚੀਨ ਵਿਚਕਾਰ ਆਬਾਦੀ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਸੰਬੰਧੀ ਅਧਿਐਨਾਂ ਲਈ ਸੰਸਾਧਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।1, 2, 3, 6,10,12,14 ਅਤੇ 19 ਨੂੰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਿਭਿੰਨ SVs ਵੰਡੇ ਗਏ ਸਨ, ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਦੇ ਅੰਦਰ, ਚੋਟੀ ਦੇ ਲੋਕ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧਕ ਖੇਤਰਾਂ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ IGH, MHC, ਆਦਿ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਹੋਏ ਸਨ। ਇਹ ਅੰਦਾਜ਼ਾ ਲਗਾਉਣਾ ਵਾਜਬ ਹੈ ਕਿ ਇਹਨਾਂ SVs ਵਿੱਚ ਵਿਭਿੰਨਤਾ ਜੈਨੇਟਿਕ ਡ੍ਰਾਈਫਟ ਦੇ ਕਾਰਨ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਚੀਨ ਵਿੱਚ ਉਪ-ਜਨਸੰਖਿਆ ਲਈ ਵਿਭਿੰਨ ਵਾਤਾਵਰਣਾਂ ਦੇ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਦੇ ਸੰਪਰਕ ਵਿੱਚ ਆ ਸਕਦੀ ਹੈ।
ਹਵਾਲਾ
ਵੂ, ਜ਼ੀਕੁਨ, ਆਦਿ।"ਚੀਨੀ ਆਬਾਦੀ ਵਿੱਚ ਢਾਂਚਾਗਤ ਰੂਪਾਂ ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਫਿਨੋਟਾਈਪਾਂ, ਬਿਮਾਰੀਆਂ ਅਤੇ ਆਬਾਦੀ ਦੇ ਅਨੁਕੂਲਨ 'ਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵ."bioRxiv(2021)।
ਖਬਰਾਂ ਅਤੇ ਹਾਈਲਾਈਟਸ ਇਸ ਦਾ ਉਦੇਸ਼ ਬਾਇਓਮਾਰਕਰ ਟੈਕਨੋਲੋਜੀਜ਼ ਨਾਲ ਨਵੀਨਤਮ ਸਫਲ ਮਾਮਲਿਆਂ ਨੂੰ ਸਾਂਝਾ ਕਰਨਾ, ਅਧਿਐਨ ਦੌਰਾਨ ਲਾਗੂ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਪ੍ਰਮੁੱਖ ਤਕਨੀਕਾਂ ਦੇ ਨਾਲ-ਨਾਲ ਵਿਗਿਆਨਕ ਪ੍ਰਾਪਤੀਆਂ ਨੂੰ ਹਾਸਲ ਕਰਨਾ ਹੈ।
ਪੋਸਟ ਟਾਈਮ: ਜਨਵਰੀ-06-2022