L-iżolament tan-nuklei jinkiseb minn 10× Genomics ChromiumTM, li jikkonsisti sistema ta 'mikrofluwidi ta' tmien kanali b'qsim doppju.F'din is-sistema, żibeġ tal-ġel b'barcodes u primer, enzimi u nukleu wieħed huma inkapsulati f'qatra taż-żejt ta 'daqs nanolitru, li jiġġenera Gel Bead-in-Emulsion (GEM).Ladarba jiġu ffurmati GEM, il-liżi taċ-ċelluli u r-rilaxx tal-barcodes jitwettqu f'kull GEM.L-mRNA huma traskritti b'lura f'molekuli cDNA b'10× barcodes u UMI, li huma aktar soġġetti għal kostruzzjoni ta' librerija ta' sekwenzar standard.
Ċellula / Tessut | Raġuni |
Tessut iffriżat mhux frisk | Ma tistax tikseb organizzazzjonijiet friski jew li ilhom salvati |
Ċellula tal-muskoli, Megakaryocyte, Xaħam... | Id-dijametru taċ-ċellula huwa kbir wisq biex jidħol fl-istrument |
Fwied... | Fraġli wisq biex tkisser, ma tistax tiddistingwi ċelluli singoli |
Ċellula tan-newroni, Moħħ... | Aktar sensittivi, faċli biex tisħaq, se tbiddel ir-riżultati tas-sekwenzjar |
Frixa, Tirojde... | Sinjuri f'enzimi endoġeni, li jaffettwaw il-produzzjoni ta 'sospensjoni ta' ċellula waħda |
Nukleu wieħed | Ċellula waħda |
Dijametru taċ-ċellula bla limitu | Dijametru taċ-ċellula: 10-40 μm |
Il-materjal jista 'jkun tessut iffriżat | Il-materjal għandu jkun tessut frisk |
Stress baxx ta 'ċelloli ffriżati | It-trattament b'enżimi jista' jikkawża reazzjoni ta' stress taċ-ċelluli |
M'hemmx għalfejn jitneħħew ċelluli ħomor tad-demm | Iċ-ċelluli ħomor tad-demm jeħtieġ li jitneħħew |
Nukleari jesprimi bijoinformazzjoni | Iċ-ċellula kollha tesprimi l-bijoinformazzjoni |
Librerija | Strateġija ta' sekwenzar | Volum tad-Data | Rekwiżiti tal-Kampjun | Tessut |
10 × Librerija ta' nukleu wieħed tal-ġenomika | 10x Ġenomika -Illumina PE150 | 100,000 qari/ċellula madwar.100-200 Gb | Numru taċ-ċellula: > 2 × 105 Ċellula konċ.f'700-1,200 ċellula / μL | ≥ 200 mg |
Għal aktar dettalji dwar il-gwida tal-preparazzjoni tal-kampjuni u l-fluss tax-xogħol tas-servizz, jekk jogħġbok tħossok liberu li tkellem lil aespert BMKGENE
1.Spot clustering
2.Marker espressjoni abbundanza clustering heatmap
3.Distribuzzjoni tal-ġeni Maker fi gruppi differenti
4.Analiżi tat-trajettorja taċ-ċelluli/psewdotime