● Iżolament u kultivazzjoni ħielsa għall-profil tal-komunità mikrobjali
● Riżoluzzjoni għolja fl-iskoperta ta 'speċi ta' abbundanza baxxa f'kampjuni ambjentali
● L-idea ta '"meta-" tintegra l-karatteristiċi bijoloġiċi kollha fil-livell funzjonali, fil-livell tal-ispeċi u fil-livell tal-ġeni, li tirrifletti ħarsa dinamika li hija eqreb tar-realtà.
● BMK jakkumula esperjenza massiva f'tipi differenti ta 'kampjuni b'aktar minn 10,000 kampjun ipproċessat.
Pjattaforma | Sekwenzar | Dejta rakkomandata | Ħin tat-tibdil |
Pjattaforma Illumina NovaSeq | PE150 | 6 G/10 G/20 G | 45 jum tax-xogħol |
● Kontroll tal-kwalità tad-dejta mhux ipproċessata
● Assemblaġġ tal-metaġenoma
● Sett u annotazzjoni tal-ġeni mhux żejda
● Analiżi tad-diversità tal-ispeċi
● Analiżi tad-diversità tal-funzjoni ġenetika
● Analiżi bejn il-gruppi
● Analiżi ta 'assoċjazzjoni kontra fatturi sperimentali
GħalEstratti tad-DNA:
Tip ta' Kampjun | Ammont | Konċentrazzjoni | Purità |
Estratti tad-DNA | > 30 ng | > 1 ng/μl | OD260/280= 1.6-2.5 |
Għal kampjuni ambjentali:
Tip ta' kampjun | Proċedura ta' teħid ta' kampjuni rakkomandata |
Ħamrija | Ammont tal-kampjun: madwar.5 g;Is-sustanza nixfin li jifdal jeħtieġ li titneħħa mill-wiċċ;Itħan biċċiet kbar u għaddi minn filtru ta’ 2 mm;Kampjuni alikwot f'tubu EP sterili jew cyrotube għar-riżervazzjoni. |
Ħmieġ | Ammont tal-kampjun: madwar.5 g;Iġbor u alikwot kampjuni f'tubu EP sterili jew krijotubu għar-riżervazzjoni. |
Kontenut intestinali | Il-kampjuni jeħtieġ li jiġu pproċessati taħt kundizzjoni asettika.Aħsel it-tessut miġbur b'PBS;Iċċentrifuga l-PBS u iġbor il-preċipitant f'tubi EP. |
Ħama | Ammont tal-kampjun: madwar.5 g;Iġbor u alikwot kampjun tal-ħama f'tubu EP sterili jew krijotubu għar-riżervazzjoni |
Korp tal-ilma | Għal kampjun b'ammont limitat ta 'mikrobi, bħal ilma tal-vit, ilma tajjeb, eċċ., Iġbor mill-inqas 1 L ilma u għaddi minn filtru ta' 0.22 μm biex tarrikkixxi l-mikrobi fuq il-membrana.Aħżen il-membrana f'tubu sterili. |
Ġilda | Obrox bir-reqqa l-wiċċ tal-ġilda b'tampun tal-qoton sterili jew xafra kirurġika u poġġiha f'tubu sterili. |
Iffriża l-kampjuni fin-nitroġenu likwidu għal 3-4 sigħat u aħżen f'nitroġenu likwidu jew -80 grad għal riżerva fit-tul.It-tbaħħir tal-kampjuni bis-silġ niexef huwa meħtieġ.
1.Histogram: Distribuzzjoni tal-ispeċi
2.Ġeni funzjonali annotati għal mogħdijiet metaboliċi KEGG
3.Mappa tas-sħana: Funzjonijiet differenzjali bbażati fuq abbundanza relattiva tal-ġeni4.Circos ta 'ġeni ta' reżistenza għall-antibijotiċi CARD
Kawża BMK
Prevalenza ta 'ġeni ta' reżistenza għall-antibijotiċi u patoġeni batterjali tul il-kontinwu tal-għeruq tal-mangrovja tal-ħamrija
Ippubblikat:Ġurnal ta 'Materjali Perikolużi, 2021
Strateġija ta' sekwenzar:
Materjali: Estratti tad-DNA ta’ erba’ frammenti ta’ kampjuni assoċjati ta’ għerq tal-mangrovja: kompartimenti ta’ ħamrija mhux imħawla, riżosfera, episfera u endosfera
Pjattaforma: Illumina HiSeq 2500
Miri: Metagenome
Reġjun V3-V4 tal-ġene rRNA 16S
Riżultati ewlenin
Is-sekwenzjar metaġenomika u l-profiling metabarcoding fuq il-kontinwu tal-għeruq tal-ħamrija ta 'żwiemel tal-mangrovja ġew ipproċessati sabiex tiġi studjata t-tixrid ta' ġeni ta 'reżistenza għall-antibijotiċi (ARGs) mill-ħamrija fil-pjanti.Id-dejta metaġenomika wriet li 91.4% tal-ġeni ta 'reżistenza għall-antibijotiċi kienu identifikati b'mod komuni fl-erba' kompartimenti tal-ħamrija msemmija hawn fuq, li wrew moda kontinwa.Is-sekwenzjar tal-amplicon 16S rRNA ġġenera 29,285 sekwenza, li jirrappreżentaw 346 speċi.Meta tgħaqqad mal-profil tal-ispeċi permezz tas-sekwenzjar tal-amplicon, din id-disseminazzjoni nstabet li hija indipendenti mill-mikrobijota assoċjata mal-għeruq, madankollu, tista 'tiġi ffaċilitata minn elementi ġenetiċi mobbli.Dan l-istudju identifika l-fluss ta 'ARGs u patoġeni mill-ħamrija fil-pjanti permezz ta' continuum interkonness tal-ħamrija-għerq.
Referenza
Wang, C. , Hu, R. , Qawwija, PJ , Zhuang, W. , & Shu, L. .(2020).Prevalenza ta 'ġeni ta' reżistenza għall-antibijotiċi u patoġeni batterjali tul il-kontinwu tal-għeruq tal-ħamrija-mangrovja.Ġurnal ta 'Materjali Perikolużi, 408, 124985.