Penjujukan RNA nukleus tunggal

Kemajuan dalam penangkapan sel tunggal dan teknik pembinaan perpustakaan individu yang digabungkan dengan penjujukan pemprosesan tinggi membolehkan kajian ekspresi gen berdasarkan sel demi sel.Ia membolehkan analisis sistem yang lebih mendalam dan lengkap pada populasi sel yang kompleks, di mana ia sebahagian besarnya mengelakkan penyamaran heterogen mereka dengan mengambil purata semua sel.

Walau bagaimanapun, sesetengah sel tidak sesuai untuk dijadikan ampaian sel tunggal, jadi kaedah penyediaan sampel lain – pengekstrakan nukleus daripada tisu diperlukan, iaitu nukleus diekstrak terus daripada tisu atau sel dan disediakan menjadi ampaian nukleus tunggal untuk satu- penjujukan sel.

BMK menyediakan perkhidmatan penjujukan RNA sel tunggal berasaskan 10× Genomics ChromiumTM.Perkhidmatan ini telah digunakan secara meluas dalam kajian tentang kajian berkaitan penyakit, seperti pembezaan sel imun, heterogeniti tumor, perkembangan tisu, dsb.

Cip transkrip spatial: 10× Genomik

Platform: Platform Illumina NovaSeq

Hubungi Kami

Butiran Perkhidmatan

Bioinformatik

Keputusan Demo

Prinsip teknikal

Pengasingan nukleus dicapai oleh 10× Genomics ChromiumTM, yang terdiri daripada sistem mikrobendalir lapan saluran dengan lintasan berganda.Dalam sistem ini, manik gel dengan kod bar dan primer, enzim dan nukleus tunggal dikapsulkan dalam titisan minyak bersaiz nanoliter, menghasilkan Gel Bead-in-Emulsion (GEM).Setelah GEM terbentuk, lisis sel dan pelepasan kod bar dilakukan dalam setiap GEM.mRNA ditranskripsikan secara terbalik ke dalam molekul cDNA dengan kod bar 10× dan UMI, yang selanjutnya tertakluk kepada pembinaan perpustakaan penjujukan standard.

Tisu tidak sesuai untuk penyediaan penggantungan sel tunggal

Sel / Tisu	Sebab
Tisu beku yang tidak segar	Tidak dapat mendapatkan organisasi baharu atau disimpan lama
Sel otot, Megakariosit, Lemak…	Diameter sel terlalu besar untuk memasuki instrumen
Hati…	Terlalu rapuh untuk pecah, tidak dapat membezakan sel tunggal
Sel neuron, Otak…	Lebih sensitif, mudah tertekan, akan mengubah hasil penjujukan
Pankreas, Tiroid…	Kaya dengan enzim endogen, menjejaskan pengeluaran penggantungan sel tunggal

Nukleus tunggal vs Sel tunggal

Nukleus tunggal	Sel tunggal
Diameter sel tanpa had	Diameter sel: 10-40 μm
Bahannya boleh menjadi tisu beku	Bahan mestilah tisu segar
Tekanan rendah sel beku	Rawatan enzim boleh menyebabkan tindak balas tekanan sel
Tiada sel darah merah perlu dibuang	Sel darah merah perlu dibuang
Nuklear mengekspresikan biomaklumat	Seluruh sel mengekspresikan biomaklumat