Такаги и сор., Дневник за растенијата, 2013 година
● Точна локализација: Мешање на големини со 30+30 до 200+200 поединци за да се минимизира бучавата во позадина;Предвидување на кандидатскиот регион засновано на несинонимни мутанти.
● Сеопфатна анализа: длабинска белешка на функцијата на кандидатот за ген, вклучувајќи NR, SwissProt, GO, KEGG, COG, KOG итн.
● Побрзо време на пресврт: Брза локализација на генот во рок од 45 работни дена.
● Огромно искуство: БМК придонесе за локализација на илјадници особини, покривајќи различни видови како што се култури, водни производи, шуми, цвеќиња, овошје итн.
Популација:
Сегрегирање на потомството на родители со спротивставени фенотипови.
на пр. F2 потомство, повратен вкрстување (BC), Рекомбинантна вродена линија (RIL)
Базен за мешање
За квалитативни особини: 30 до 50 лица (минимум 20)/рефус
За квантитативни тратис: врвни 5% до 10% индивидуи со екстремни фенотипови во целата популација (минимум 30+30).
Препорачана длабочина на секвенционирање
Најмалку 20X/родител и 1X/поединец од потомство (на пр. за базен за мешање потомци од 30+30 поединци, длабочината на секвенционирање ќе биде 30x по најголемиот дел)
● Ресеквенцирање на целиот геном
● Обработка на податоци
● Повикување SNP/Indel
● Скрининг на регионот на кандидатот
● Прибелешка за функцијата на кандидатот за ген
Нуклеотиди:
примерок од гДНК | Примерок од ткиво |
Концентрација: ≥30 ng/μl | Растенија: 1-2 гр |
Количина: ≥2 μg (волумен ≥15 μl) | Животни: 0,5-1 g |
Чистота: OD260/280= 1,6-2,5 | Цела крв: 1,5 ml |
1. База на анализа на асоцијација на Евклидовото растојание (ЕД) за да се идентификува регион кандидат.На следната слика
X-оска: Хромозомски број;Секоја точка претставува ED вредност на SNP.Црната линија одговара на вградената вредност на ЕД.Повисоката вредност на ЕД укажува на позначајна поврзаност помеѓу локацијата и фенотипот.Црвената цртичка линија претставува праг на значајна поврзаност.
2. Анализа на асоцијација базирана без SNP-индекс
X-оска: Хромозомски број;Секоја точка ја претставува вредноста на SNP-индексот.Црната линија значи вградена вредност на SNP-индексот.Колку е поголема вредноста, толку е позначајна асоцијацијата.
Случај БМК
Локусот на квантитативна особина со главен ефект Fnl7.1 кодира изобилен протеин од доцната ембриогенеза поврзан со должината на вратот на овошјето во краставицата
Објавено: Весник за биотехнологија на растенијата, 2020 година
Стратегија за секвенционирање:
Родители (Jin5-508, YN): Ресеквенционирање на целиот геном за 34× и 20×.
ДНК базени (50 со долг врат и 50 со краток врат): Ресеквенционирање за 61× и 52×
Клучни резултати
Во оваа студија, сегрегирачката популација (F2 и F2: 3) беше генерирана со вкрстување на линијата на краставица со долг врат Jin5-508 и YN со краток врат.Два ДНК базени беа изградени од 50 лица со екстремен долг врат и 50 лица со екстремно краток врат.QTL со голем ефект беше идентификуван на Chr07 со BSA анализа и традиционално QTL мапирање.Регионот кандидат беше дополнително стеснет со фино мапирање, квантификација на генската експресија и трансгенски експерименти, кои го открија клучниот ген во контролирањето на должината на вратот, CsFnl7.1.Дополнително, полиморфизмот во промотерскиот регион CsFnl7.1 е поврзан со соодветната експресија.Понатамошната филогенетска анализа сугерираше дека локусот Fnl7.1 е многу веројатно да потекнува од Индија.
QTL-мапирање во анализата на BSA за да се идентификува регионот кандидат поврзан со должината на вратот на краставицата | LOD профили на QTL должина на краставица до вратот идентификувани на Chr07 |
Ксу, X., и сор.„Локсот на квантитативна особина со главен ефект Fnl7.1 кодира изобилен протеин од доцната ембриогенеза поврзан со должината на овошниот врат во краставицата“.Plant Biotechnology Journal 18.7 (2020).