Sequenzéierungsmodus | Bibliothéik Gréisst | Theoretesch DonnéeënYield (pro Zell) | Single-BasisGenauegkeet | Uwendungen |
CLR | 20Kb, 30Kb, etc. | 80 Gb bis 130 Gb | ca.85% | De neie, SV Opruff, etc. |
CCS | 15-20 Kb | 14 bis 40 Gb/Zell (Sequel II) 70 bis 110 Gb/Zell (Revio) Hänkt vun de Proben of | ca.99% | De neie, SNP/Indel/SV ruffen, Iso-Seq, |
Konditioune | Sequel II System | Revio System | Erhéijung |
Méi héich Dicht | 8 Milliounen ZMWs | 25 Milliounen ZMWs | 3x |
Onofhängeg Etappen | 1 | 4 | 4x |
Méi kuerz Lafzäiten | 30 Stonnen | 24 Stonnen | 1, 25x |
30X HiFi Mënsch Genomen / Joer | 88 | 1.300 | 15x insgesamt |
● Iwwer 8 Joer Erfahrung op PacBio Sequenzéierungsplattform mat Dausende vu zouene Projete mat verschiddenen Arten.
● Voll equipéiert mat de leschten PacBio Sequencing Plattformen, Revio fir genuch Sequenzéierungsduerchgang ze garantéieren.
● Méi séier Wendungszäit, méi héich Datenaustausch a méi genee Daten.
● Bei Honnerte vu PacBio-baséiert Publikatiounen bäigedroen.
Beispill Typ | Betrag | Konzentratioun (Qubit®) | Volumen | Rengheet | Anerer |
Genomesch DNA | Hänkt vun Daten Ufuerderung | ≥50 ng/μl | ≥15μl | OD260/280=1,7-2,2; OD260/230=1.8-2.5; Kloer Peak bei 260 nm,keng Kontaminatioune | Konzentratioun muss duerch Qubit a Qubit / Nanopore = 0,8-2,5 gemooss ginn |
Total RNA | ≥ 1,2 μg | ≥120 ng/μl | ≥15μl | OD260/280=1,7-2,5; OD260/230=0,5-2,5;keng Kontaminatioune | RIN Wäert ≥7,5 5≥28S/18S≥1 |
1.In-Haus Data Yield
Daten generéiert aus 63 CCS Zellen (vu 26 Arten)
DATA-PacBio-CCS-15 Kb | Duerchschnëtt | Max | Min | Median |
Yield - Ënnerliesungen (Gb) | 421.12 | 544,27 | 221,38 | 426,58 |
Yiled - CCS(Gb) | 25,93 | 38,59 | 10,86 | 25.43 |
Polymerase N50 | 145.651 | 175.430 | 118,118 | 144.689 |
Subreads N50 | 17.509 | 23.924 | 12.485 | 17.584 |
CCS N50 | 14.490 | 19.034 | 9 876 | 14.747 |
Duerchschnëtt Längt-Polymerase | 67.995 | 89,379 | 49,664 | 66,433 |
Duerchschnëtt Längt-Subreads | 15.866 | 21.036 | 11.657 | 16.012 |
Duerchschnëtt Längt-CCS | 14.489 | 19.074 | 8.575 | 14.655 |
Daten generéiert vu 16 CLR Zellen (vu 76 Arten)
DATA-PacBio-CLR-30Kb | Duerchschnëtt | Max | Min | Median |
Yield - Ënnerliesungen (Gb) | 142,20 | 291,40 | 50,55 | 142,49 |
Polymerase N50 | 39.456 | 121,191 | 15.389 | 35,231 |
Subreads N50 | 28.490 | 41,012 | 14.430 | 29.063 |
Duerchschnëtt Längt-Polymerase | 22.063 | 48.886 | 8 747 | 21.555 |
Duerchschnëtt Längt-Subreads | 17.720 | 27.225 | 8,293 | 17.779 |
2.Daten QC - DemoStatistiken iwwer d'Datenausgab
Prouf | ccs Liest Num | Total ccs Base (bp) | ccs liest N50 (bp) | ccs Mëttellängt (bp) | ccs längsten Lies (bp) | subreads Basen (bp) | ccs Taux (%) |
PB_BMKxxx | 3.444.159 | 54.164.122.586 | 15.728 | 15.726 | 36,110 | 863,326,330,465 | 6.27 |