핵 분리는 이중 교차가 있는 8채널 미세유체 시스템으로 구성된 10× Genomics ChromiumTM을 통해 이루어집니다.이 시스템에서는 바코드와 프라이머, 효소 및 단일 핵이 포함된 젤 비드가 나노리터 크기의 오일 방울에 캡슐화되어 GEM(Gel Bead-in-Emulsion)을 생성합니다.GEM이 형성되면 각 GEM에서 세포 용해 및 바코드 방출이 수행됩니다.mRNA는 10× 바코드와 UMI를 사용하여 cDNA 분자로 역전사되며, 이는 표준 시퀀싱 라이브러리 구성의 대상이 됩니다.
세포/조직 | 이유 |
신선하지 않은 냉동 조직 | 새로운 조직이나 오랫동안 저장된 조직을 가져올 수 없습니다. |
근육세포, 거핵세포, 지방… | 셀 직경이 너무 커서 기기에 들어갈 수 없습니다. |
간… | 부서지기에는 너무 약해서 단일 세포를 구별할 수 없습니다. |
뉴런 세포, 뇌… | 더 민감하고 스트레스를 받기 쉬우며 시퀀싱 결과가 변경됩니다. |
췌장, 갑상선… | 내인성 효소가 풍부하여 단세포 현탁액 생산에 영향을 미침 |
단일핵 | 단세포 |
무제한 셀 직경 | 세포 직경: 10-40μm |
재료는 냉동 조직일 수 있습니다. | 재료는 신선한 조직이어야 합니다. |
냉동 세포의 낮은 스트레스 | 효소 처리는 세포 스트레스 반응을 일으킬 수 있습니다 |
적혈구를 제거할 필요가 없습니다. | 적혈구를 제거해야 합니다. |
핵은 생물정보를 표현한다 | 전체 세포는 생물 정보를 표현합니다 |
도서관 | 시퀀싱 전략 | 데이터 볼륨 | 샘플 요구 사항 | 조직 |
10× 유전체학 단일핵 라이브러리 | 10x 유전체학 -Illumina PE150 | 100,000 읽기/셀 약.100-200GB | 세포 수: >2× 105 세포 농도700-1,200 세포/μL에서 | ≥ 200mg |
샘플 준비 지침 및 서비스 워크플로에 대한 자세한 내용은 언제든지 담당자에게 문의하세요.BMKGENE 전문가
1.스팟 클러스터링
2.마커 발현 풍부도 클러스터링 히트맵
4.세포 궤적 분석/의사 시간