Ядроларды оқшаулау 10× Genomics ChromiumTM арқылы жүзеге асырылады, ол қос айқаспалы сегіз арналы микрофлюидикалық жүйеден тұрады.Бұл жүйеде штрих-кодтары мен праймерлері, ферменттері және бір ядросы бар гель моншақтары нанолитр көлеміндегі май тамшысына инкапсулирленіп, гель моншақтары эмульсияда (GEM) жасалады.GEM пайда болғаннан кейін әрбір GEM-де жасуша лизисі және штрих-кодтардың шығарылуы орындалады.мРНҚ 10 × штрих-кодтары және UMI бар cDNA молекулаларына кері транскрипцияланады, олар әрі қарай стандартты секвенирлеу кітапханасының құрылысына жатады.
Жасуша/тін | Себеп |
Мұздатылған тіндерді жаңартыңыз | Жаңа немесе ұзақ сақталған ұйымдарды алу мүмкін емес |
Бұлшықет жасушасы, мегакариоцит, май... | Ұяшық диаметрі құралға кіру үшін тым үлкен |
Бауыр… | Сынуға тым нәзік, жалғыз жасушаларды ажырата алмайды |
Нейрондық жасуша, ми… | Неғұрлым сезімтал, стресске оңай, реттілік нәтижелерін өзгертеді |
Ұйқы безі, Қалқанша безі… | Бір жасушалық суспензия өндірісіне әсер ететін эндогендік ферменттерге бай |
Бір ядролы | Бір жасушалы |
Шексіз ұяшық диаметрі | Жасушаның диаметрі: 10-40 мкм |
Материал мұздатылған тін болуы мүмкін | Материал жаңа тін болуы керек |
Мұздатылған жасушалардың төмен кернеуі | Ферментті емдеу жасушалық стресс реакциясын тудыруы мүмкін |
Қызыл қан жасушаларын жою қажет емес | Қызыл қан жасушаларын жою керек |
Ядролық экспрессиялық биоақпарат | Бүкіл жасуша биоақпаратты білдіреді |
Кітапхана | Тізбектеу стратегиясы | Деректер көлемі | Үлгіге қойылатын талаптар | Мата |
10 × Геномикалық бір ядролық кітапхана | 10x Genomics -Illumina PE150 | 100 000 оқылым/ұяшыққа жуық.100-200 Гб | Ұяшық нөмірі: >2×105 Ұяшық конс.700-1200 ұяшық/мкл | ≥ 200 мг |
Үлгіні дайындау бойынша нұсқаулық және қызмет көрсету жұмыс процесі туралы қосымша мәліметтер алу үшін аBMKGENE сарапшысы
1.Дақтық кластерлеу
2.Маркер өрнегі молшылық кластерлеу жылу картасы
3. Әртүрлі кластерлерде мейкер генінің таралуы
4.Жасуша траекториясын талдау/псевдоуақыт