בידוד הגרעינים מושג על ידי 10× Genomics ChromiumTM, המורכבת ממערכת מיקרופלואידיקה בעלת שמונה ערוצים עם מעברים כפולים.במערכת זו, חרוזי ג'ל עם ברקודים ופריימר, אנזימים וגרעין בודד מכוסים בטיפות שמן בגודל ננוליטר, מה שיוצר חרוז ג'ל בתחליב (GEM).לאחר היווצרות GEM, תמוגה תאים ושחרור ברקודים מבוצעים בכל GEM.mRNA משועתקים לאחור למולקולות cDNA עם ברקודים 10× ו-UMI, אשר כפופות עוד יותר לבניית ספריית רצף סטנדרטית.
תא / רקמה | סיבה |
רקמה קפואה לא טרייה | לא ניתן להשיג ארגונים טריים או שנשמרו זמן רב |
תא שריר, מגהקריוציט, שומן... | קוטר התא גדול מכדי להיכנס למכשיר |
כָּבֵד… | שביר מכדי לשבור, לא מסוגל להבחין בין תאים בודדים |
תא נוירונים, מוח... | רגיש יותר, קל ללחץ, ישנה את תוצאות הרצף |
לבלב, בלוטת התריס… | עשיר באנזימים אנדוגניים, המשפיעים על ייצור תרחיף תא בודד |
גרעין יחיד | תא בודד |
קוטר תא בלתי מוגבל | קוטר התא: 10-40 מיקרומטר |
החומר יכול להיות רקמה קפואה | החומר חייב להיות רקמה טרייה |
מתח נמוך של תאים קפואים | טיפול באנזימים עלול לגרום לתגובת מתח בתאים |
אין צורך להסיר תאי דם אדומים | יש להסיר תאי דם אדומים |
גרעיני מבטא מידע ביולוגי | התא כולו מבטא מידע ביולוגי |
סִפְרִיָה | אסטרטגיית רצף | נפח נתונים | דרישות לדוגמא | רִקמָה |
ספריית גרעינים בודדים של 10× Genomics | 10x Genomics -Illumina PE150 | 100,000 קריאה/תא בערך.100-200 ג'יגה-בייט | מספר תא: >2×105 קונצרן תאיםב-700-1,200 תאים/μL | ≥ 200 מ"ג |
לפרטים נוספים על הדרכה לדוגמא וזרימת עבודה של שירות, אל תהסס לדבר עם אמומחה BMKGENE
1. מקבץ נקודות
2. מפת חום מפת חום של שפע ביטוי מרקר
3. מייצר הפצת גנים באשכולות שונים
4. ניתוח מסלול תא/פסאודו זמן