sekuensing mRNA mengadopsi teknik sekuensing generasi berikutnya (NGS) untuk menangkap RNA pembawa pesan (mRNA) dari Eukariota pada periode tertentu yang mengaktifkan beberapa fungsi khusus.Transkrip terpanjang yang disambung disebut 'Unigene' dan digunakan sebagai urutan referensi untuk analisis selanjutnya, yang merupakan cara efektif untuk mempelajari mekanisme molekuler dan jaringan regulasi spesies tanpa referensi.
Setelah perakitan data transkriptom dan anotasi fungsional unigene
(1) Analisis SNP, analisis SSR, prediksi CDS dan struktur gen akan dibentuk sebelumnya.
(2) Kuantifikasi ekspresi unigen di setiap sampel akan dilakukan.
(3) Unigen yang diekspresikan secara berbeda antara sampel (atau kelompok) akan ditemukan berdasarkan ekspresi unigen
(4) Pengelompokan, anotasi fungsional, dan analisis pengayaan dari unigen yang diekspresikan secara berbeda akan dilakukan