Միջուկների մեկուսացումը կատարվում է 10× Genomics ChromiumTM-ի միջոցով, որը բաղկացած է ութ-ալիքային միկրոհեղուկ համակարգից՝ կրկնակի հատումներով:Այս համակարգում շտրիխ կոդերով և այբբենարանով գելային ուլունքները, ֆերմենտները և մեկ միջուկը պարփակվում են նանոլիտրի չափ յուղի կաթիլում՝ առաջացնելով Gel Bead-in-Emulsion (GEM):Երբ GEM-ը ձևավորվում է, յուրաքանչյուր GEM-ում կատարվում է բջիջների լիզում և շտրիխ կոդերի թողարկում:mRNA-ն հակադարձ տառադարձվում է cDNA մոլեկուլների՝ 10× շտրիխ կոդերով և UMI-ով, որոնք հետագայում ենթակա են ստանդարտ հաջորդականության գրադարանի կառուցմանը:
Բջջային / Հյուսվածք | Պատճառ |
Չթարմացրեք սառեցված հյուսվածքը | Հնարավոր չէ ստանալ թարմ կամ երկար ժամանակ պահպանված կազմակերպություններ |
Մկանային բջիջ, մեգակարիոցիտ, ճարպ… | Բջջի տրամագիծը չափազանց մեծ է գործիք մտնելու համար |
Լյարդ… | Չափազանց փխրուն է կոտրելու համար, անկարող է տարբերակել առանձին բջիջները |
Նեյրոնային բջիջ, ուղեղ… | Ավելի զգայուն, հեշտ սթրեսի համար, կփոխի հաջորդականության արդյունքները |
Ենթաստամոքսային գեղձ, վահանաձև գեղձ… | Հարուստ է էնդոգեն ֆերմենտներով, որոնք ազդում են միայնակ բջջային կասեցման արտադրության վրա |
Միակ միջուկ | Միաբջիջ |
Անսահմանափակ բջջային տրամագիծ | Բջջի տրամագիծը՝ 10-40 մկմ |
Նյութը կարող է լինել սառեցված հյուսվածք | Նյութը պետք է լինի թարմ հյուսվածք |
Սառեցված բջիջների ցածր սթրեսը | Ֆերմենտային բուժումը կարող է առաջացնել բջիջների սթրեսային ռեակցիա |
Կարիք չկա արյան կարմիր բջիջների հեռացում | Կարմիր արյան բջիջները պետք է հեռացվեն |
Միջուկային էքսպրես բիոինֆորմացիա | Ամբողջ բջիջն արտահայտում է բիոինֆորմացիա |
Գրադարան | Հերթականության ռազմավարություն | Տվյալների ծավալը | Նմուշի պահանջներ | Հյուսվածք |
10× Genomics մեկ միջուկային գրադարան | 10x Genomics - Illumina PE150 | 100000 ընթերցում/բջջ մոտ.100-200 Գբ | Բջջի համարը՝ >2× 105 Բջջի խտ.700-1200 բջիջ / μL-ում | ≥ 200 մգ |
Նմուշի պատրաստման ուղեցույցի և սպասարկման աշխատանքի ընթացքի վերաբերյալ լրացուցիչ մանրամասների համար խնդրում ենք ազատ զգալ զրուցել aBMKGENE փորձագետ
1.Կետերի կլաստերավորում
2. Մարկեր արտահայտության առատության կլաստերային ջերմային քարտեզ
3. Maker գեների բաշխումը տարբեր կլաստերներում
4. Բջջի հետագծի վերլուծություն/կեղծ ժամանակ