ताकागी एट अल., द प्लांट जर्नल, 2013
● सटीक स्थानीयकरण: पृष्ठभूमि शोर को कम करने के लिए 30+30 से 200+200 व्यक्तियों के साथ थोक मिश्रण;गैर-पर्यायवाची उत्परिवर्ती-आधारित उम्मीदवार क्षेत्र भविष्यवाणी।
● व्यापक विश्लेषण: एनआर, स्विसप्रोट, जीओ, केईजीजी, सीओजी, केओजी, आदि सहित गहन उम्मीदवार जीन फ़ंक्शन एनोटेशन।
● तेज़ टर्नअराउंड समय: 45 कार्य दिवसों के भीतर तीव्र जीन स्थानीयकरण।
● व्यापक अनुभव: बीएमके ने फसलों, जलीय उत्पादों, जंगल, फूल, फल आदि जैसी विविध प्रजातियों को कवर करते हुए हजारों लक्षणों के स्थानीयकरण में योगदान दिया है।
जनसंख्या:
विरोधी फेनोटाइप वाले माता-पिता की संतानों को अलग करना।
उदाहरण के लिए F2 संतान, बैकक्रॉसिंग (BC), रीकॉम्बिनेंट इनब्रेड लाइन (RIL)
मिश्रण पूल
गुणात्मक गुणों के लिए: 30 से 50 व्यक्ति (न्यूनतम 20)/थोक
मात्रात्मक ट्रैटिस के लिए: पूरी आबादी में चरम फेनोटाइप वाले शीर्ष 5% से 10% व्यक्ति (न्यूनतम 30+30)।
अनुशंसित अनुक्रमण गहराई
कम से कम 20X/माता-पिता और 1X/संतान व्यक्ति (उदाहरण के लिए 30+30 व्यक्तियों के संतान मिश्रण पूल के लिए, अनुक्रमण गहराई 30X प्रति थोक होगी)
● संपूर्ण जीनोम का पुनः अनुक्रमण
● डाटा प्रोसेसिंग
● एसएनपी/इंडेल कॉलिंग
● उम्मीदवार क्षेत्र स्क्रीनिंग
● उम्मीदवार जीन फ़ंक्शन एनोटेशन
न्यूक्लियोटाइड्स:
जीडीएनए नमूना | ऊतक का नमूना |
एकाग्रता: ≥30 एनजी/μl | पौधे: 1-2 ग्राम |
मात्रा: ≥2 μg (वॉल्यूम ≥15 μl) | पशु: 0.5-1 ग्राम |
शुद्धता: OD260/280= 1.6-2.5 | संपूर्ण रक्त: 1.5 मि.ली |
1.उम्मीदवार क्षेत्र की पहचान करने के लिए यूक्लिडियन दूरी (ईडी) पर एसोसिएशन विश्लेषण का आधार।निम्नलिखित चित्र में
एक्स-अक्ष: गुणसूत्र संख्या;प्रत्येक बिंदु एक एसएनपी के ईडी मान का प्रतिनिधित्व करता है।काली रेखा फिट किए गए ईडी मान से मेल खाती है।उच्च ईडी मान साइट और फेनोटाइप के बीच अधिक महत्वपूर्ण संबंध को इंगित करता है।लाल डैश रेखा महत्वपूर्ण जुड़ाव की सीमा को दर्शाती है।
2.एसोसिएशन विश्लेषण आधारित कोई एसएनपी-सूचकांक नहीं
एक्स-अक्ष: गुणसूत्र संख्या;प्रत्येक बिंदु एसएनपी-सूचकांक मान का प्रतिनिधित्व करता है।काली रेखा फिट किए गए एसएनपी-सूचकांक मान के लिए है।मूल्य जितना बड़ा होगा, जुड़ाव उतना ही अधिक महत्वपूर्ण होगा।
बीएमके मामला
प्रमुख-प्रभाव मात्रात्मक विशेषता लोकस Fnl7.1 खीरे में फल की गर्दन की लंबाई से जुड़े देर से भ्रूणजनन प्रचुर मात्रा में प्रोटीन को एनकोड करता है।
प्रकाशित: प्लांट बायोटेक्नोलॉजी जर्नल, 2020
अनुक्रमण रणनीति:
माता-पिता (Jin5-508, YN): 34× और 20× के लिए संपूर्ण जीनोम पुनरुत्पादन।
डीएनए पूल (50 लंबी गर्दन वाले और 50 छोटी गर्दन वाले): 61× और 52× के लिए पुन: अनुक्रमण
मुख्य परिणाम
इस अध्ययन में, लंबी गर्दन वाली ककड़ी लाइन Jin5-508 और छोटी गर्दन वाली YN को पार करके अलग-अलग आबादी (F2 और F2:3) उत्पन्न की गई थी।दो डीएनए पूल का निर्माण 50 अत्यधिक लंबी गर्दन वाले व्यक्तियों और 50 अत्यधिक छोटी गर्दन वाले व्यक्तियों द्वारा किया गया था।प्रमुख-प्रभाव क्यूटीएल की पहचान बीएसए विश्लेषण और पारंपरिक क्यूटीएल मैपिंग द्वारा Chr07 पर की गई थी।उम्मीदवार क्षेत्र को फाइन-मैपिंग, जीन अभिव्यक्ति मात्रा निर्धारण और ट्रांसजेनिक प्रयोगों द्वारा और अधिक संकुचित कर दिया गया, जिससे गर्दन की लंबाई को नियंत्रित करने में प्रमुख जीन, CsFnl7.1 का पता चला।इसके अलावा, CsFnl7.1 प्रमोटर क्षेत्र में बहुरूपता को संबंधित अभिव्यक्ति के साथ जुड़ा हुआ पाया गया।आगे फ़ाइलोजेनेटिक विश्लेषण से पता चला कि Fnl7.1 लोकस की उत्पत्ति भारत से होने की बहुत संभावना है।
खीरे की गर्दन की लंबाई से जुड़े उम्मीदवार क्षेत्र की पहचान करने के लिए बीएसए विश्लेषण में क्यूटीएल-मैपिंग | खीरे की गर्दन की लंबाई वाली क्यूटीएल की एलओडी प्रोफाइल Chr07 पर पहचानी गई |
जू, एक्स., एट अल."प्रमुख-प्रभाव मात्रात्मक विशेषता लोकस Fnl7.1 खीरे में फल की गर्दन की लंबाई से जुड़े देर से भ्रूणजनन प्रचुर मात्रा में प्रोटीन को एनकोड करता है।"प्लांट बायोटेक्नोलॉजी जर्नल 18.7(2020)।