جداسازی هسته ها توسط 10× Genomics ChromiumTM، که شامل سیستم میکروسیال هشت کانالی با تقاطع های دوگانه است، به دست می آید.در این سیستم، دانههای ژل با بارکد و پرایمر، آنزیمها و یک هسته در قطرهای روغنی به اندازه نانولیتر کپسوله میشوند و ژل Bead-in-Emulsion (GEM) تولید میکنند.هنگامی که GEM تشکیل شد، لیز سلولی و انتشار بارکدها در هر GEM انجام می شود.mRNA معکوس به مولکولهای cDNA با بارکد 10× و UMI رونویسی میشود، که بیشتر در معرض ساخت کتابخانه توالییابی استاندارد هستند.
سلول / بافت | دلیل |
بافت منجمد را تازه نکنید | نمیتوان سازمانهای تازه یا با مدت طولانی ذخیره شده را دریافت کرد |
سلول عضلانی، مگاکاریوسیت، چربی… | قطر سلول برای ورود به ابزار خیلی بزرگ است |
کبد… | خیلی شکننده برای شکستن، قادر به تشخیص تک سلولی نیست |
سلول عصبی، مغز… | حساس تر، آسان به استرس، نتایج توالی را تغییر می دهد |
پانکراس، تیروئید… | غنی از آنزیم های درون زا است که بر تولید سوسپانسیون تک سلولی تأثیر می گذارد |
تک هسته ای | تک سلولی |
قطر سلول نامحدود | قطر سلول: 10-40 میکرومتر |
این ماده می تواند بافت منجمد باشد | مواد باید بافت تازه باشد |
استرس کم سلول های منجمد | درمان آنزیمی ممکن است باعث واکنش استرس سلولی شود |
نیازی به حذف گلبول قرمز نیست | گلبول های قرمز باید برداشته شوند |
هسته ای بیواناطلاعات را بیان می کند | کل سلول اطلاعات زیستی را بیان می کند |
کتابخانه | استراتژی توالی | حجم داده ها | نمونه مورد نیاز | بافت |
10× کتابخانه تک هسته ای ژنومیکس | 10x Genomics -Illumina PE150 | 100000 خواندن در سلول تقریبا100-200 گیگ | شماره همراه: >2×105 کانکس سلولدر 700-1200 سلول در میکرولیتر | ≥ 200 میلی گرم |
برای جزئیات بیشتر در مورد راهنمای آمادهسازی نمونه و گردش کار خدمات، لطفاً با a صحبت کنیدکارشناس BMKGENE
1. خوشه بندی نقطه ای
2.نقشه حرارتی خوشه بندی فراوانی بیان نشانگر
3. توزیع ژن سازنده در خوشه های مختلف
4. تجزیه و تحلیل مسیر سلولی / شبه زمان