Ενώ η αλληλουχία mRNA που βασίζεται σε NGS χρησιμεύει ως ένα ευέλικτο εργαλείο για την ποσοτικοποίηση της γονιδιακής έκφρασης, η εξάρτησή της από σύντομες αναγνώσεις περιορίζει την αποτελεσματικότητά της σε πολύπλοκες μεταγραφικές αναλύσεις.Η αλληλούχιση PacBio (Iso-Seq), από την άλλη πλευρά, χρησιμοποιεί τεχνολογία μακράς ανάγνωσης, επιτρέποντας τον προσδιορισμό της αλληλουχίας μεταγραφών mRNA πλήρους μήκους.Αυτή η προσέγγιση διευκολύνει μια ολοκληρωμένη εξερεύνηση εναλλακτικού ματίσματος, συντήξεων γονιδίων και πολυ-αδενυλίωσης, αν και δεν είναι η κύρια επιλογή για την ποσοτικοποίηση της γονιδιακής έκφρασης.Ο συνδυασμός 2+3 γεφυρώνει το χάσμα μεταξύ Illumina και PacBio βασιζόμενος στις αναγνώσεις HiFi του PacBio για τον προσδιορισμό του πλήρους συνόλου των ισομορφών μεταγραφής και της αλληλουχίας NGS για τον ποσοτικό προσδιορισμό των ίδιων ισομορφών.
Πλατφόρμες: PacBio Sequel II και Illumina NovaSeq