● Cydosod o ansawdd uchel - Gwella cywirdeb adnabod rhywogaethau a rhagfynegi genynnau swyddogaethol
● Ynysu genom bacteriol caeedig
● Cymhwysiad mwy pwerus a dibynadwy mewn meysydd amrywiol, ee canfod micro-organebau pathogenig neu enynnau sy'n gysylltiedig ag ymwrthedd i wrthfiotigau
● Dadansoddiad metagenom cymharol
Platfform | Dilyniannu | Data a argymhellir | Amser Turnaround |
Nanopore | ONT | 6 G/10 G | 65 diwrnod gwaith |
● Rheoli ansawdd data crai
● cynulliad Metagenome
● Set genynnau nad ydynt yn cael eu defnyddio ac anodi
● Dadansoddiad amrywiaeth rhywogaethau
● Dadansoddi amrywiaeth swyddogaethau genetig
● Dadansoddiad rhwng grwpiau
● Dadansoddiad cysylltiad yn erbyn ffactorau arbrofol
Gofynion Sampl:
CanysEchdynion DNA:
Math Sampl | Swm | Crynodiad | Purdeb |
Echdynion DNA | 1-1.5 μg | > 20 ng/μl | OD260/280= 1.6-2.5 |
Ar gyfer samplau amgylcheddol:
Math o sampl | Y weithdrefn samplu a argymhellir |
Pridd | Swm samplu: tua.5 g;Mae angen tynnu'r sylwedd gwywo sy'n weddill o'r wyneb;Malu darnau mawr a phasio drwy hidlydd 2 mm;Sampl Aliquot mewn tiwb EP di-haint neu gyrotube i'w cadw. |
Feces | Swm samplu: tua.5 g;Casglu a didoli samplau mewn tiwb EP di-haint neu cryotube i'w cadw. |
Cynnwys berfeddol | Mae angen prosesu samplau o dan gyflwr aseptig.Golchwch feinwe a gasglwyd gyda PBS;Allgyrchu'r PBS a chasglu'r gwaddod mewn tiwbiau EP. |
Llaid | Swm samplu: tua.5 g;Casglu a didoli sampl llaid mewn tiwb EP di-haint neu cryotube i'w gadw |
Corff dwr | Ar gyfer sampl gyda swm cyfyngedig o ficrobaidd, megis dŵr tap, dŵr ffynnon, ac ati, Casglwch o leiaf 1 L dŵr a phasio trwy hidlydd 0.22 μm i gyfoethogi microbaidd ar y bilen.Storiwch y bilen mewn tiwb di-haint. |
Croen | Crafu wyneb y croen yn ofalus gyda swab cotwm di-haint neu lafn lawfeddygol a'i roi mewn tiwb di-haint. |
Rhewi'r samplau mewn nitrogen hylifol am 3-4 awr a'u storio mewn nitrogen hylifol neu -80 gradd i archeb hirdymor.Mae angen cludo sampl gyda rhew sych.
1.Heatmap: Clystyru cyfoeth rhywogaethauGenynnau 2.Functional wedi'u hanodi i lwybrau metabolaidd KEGGRhwydwaith cydberthynas 3.Species4.Circos o genynnau ymwrthedd gwrthfiotig CARD
Achos BMK
Mae metagenomeg Nanopore yn galluogi diagnosis clinigol cyflym o haint anadlol isaf bacteriol
Cyhoeddwyd:Biotechnoleg Natur, 2019
Uchafbwyntiau Technegol
Dilyniannu: MinION Nanopore
Biowybodeg metagenomeg glinigol: disbyddiad DNA gwesteiwr, dadansoddiad WIMP ac ARMA
Canfod cyflym: 6 awr
Sensitifrwydd uchel: 96.6%
Canlyniadau allweddol
Yn 2006, achosodd haint anadlol is (LR) 3 miliwn o farwolaethau dynol yn fyd-eang.Y dull nodweddiadol ar gyfer canfod pathogen LR1 yw amaethu, sydd â sensitifrwydd gwael, amser troi hir a diffyg arweiniad mewn therapi gwrthfiotig cynnar.Mae diagnosis microbaidd cyflym a chywir wedi bod yn angen brys ers tro.Llwyddodd Dr Justin o Brifysgol East Anglia a'i bartneriaid i ddatblygu dull metagenomig seiliedig ar Nanopor ar gyfer canfod pathogenau.Yn ôl eu llif gwaith, gall 99.99% o'r DNA gwesteiwr gael ei ddisbyddu.Gellir gorffen canfod pathogenau a genynnau sy'n gwrthsefyll gwrthfiotigau mewn 6 awr.
Cyfeiriad
Charalampous, T. , Kay, GL , Richardson, H. , Aydin, A. , & O'Grady, J. .(2019).Mae metagenomeg Nanopore yn galluogi diagnosis clinigol cyflym o haint anadlol isaf bacteriol.Biotechnoleg Natur, 37(7), 1.