● Taas nga kalidad nga asembliya-Pagpauswag sa katukma sa pag-ila sa mga espisye ug pagtagna sa funcational gene
● Closed bacterial genome isolation
● Mas gamhanan ug kasaligan nga paggamit sa lain-laing lugar, eg detection sa pathogenic microorganisms o antibiotic resistensya nga may kalabutan nga mga gene
● Comparative metagenome analysis
Plataporma | Pagsunodsunod | Girekomenda nga datos | Panahon sa Pag-usab |
Nanopore | ONT | 6 G/10 G | 65 ka adlaw sa pagtrabaho |
● Pagkontrol sa kalidad sa hilaw nga datos
● Metagenome nga asembliya
● Non-redundant gene set ug anotasyon
● Pagtuki sa kadaiyahan sa espisye
● Pagtuki sa pagkalain-lain sa function sa genetic
● Inter-grupo nga pagtuki
● Pagtuki sa asosasyon batok sa eksperimento nga mga hinungdan
Sample nga Kinahanglanon:
Alang saMga kinuha sa DNA:
Sample Type | kantidad | Konsentrasyon | Kaputli |
Mga kinuha sa DNA | 1-1.5 ug | > 20 ng/μl | OD260/280= 1.6-2.5 |
Para sa mga sample sa kinaiyahan:
Sampol nga tipo | Girekomenda nga pamaagi sa sampling |
Yuta | Gidaghanon sa sampling: gibanabana.5 g;Ang nahabilin nga nalaya nga substansiya kinahanglan nga tangtangon gikan sa nawong;Paggaling sa dagkong mga piraso ug pag-agi sa 2 mm nga filter;Aliquot samples sa sterile EP-tube o cyrotube para sa reservation. |
Mga hugaw | Gidaghanon sa sampling: gibanabana.5 g;Pagkolekta ug pag-aliquot sa mga sample sa sterile EP-tube o cryotube para sa reserbasyon. |
Mga sulod sa tinai | Ang mga sample kinahanglan nga iproseso ubos sa aseptiko nga kondisyon.Hugasi ang nakolekta nga tissue gamit ang PBS;Centrifuge ang PBS ug kolektaha ang precipitant sa EP-tubes. |
Lapok | Gidaghanon sa sampling: gibanabana.5 g;Pagkolekta ug pag-aliquot sa sludge sample sa sterile EP-tube o cryotube para sa reserbasyon |
Katubigan | Alang sa sample nga adunay limitado nga gidaghanon sa microbial, sama sa tubig sa gripo, tubig sa atabay, ug uban pa, Pagkolekta ug labing menos 1 L nga tubig ug ipasa ang 0.22 μm nga salaan aron mapauswag ang microbial sa lamad.Ibutang ang lamad sa sterile nga tubo. |
Panit | Pag-ayo sa pag-scrape sa panit gamit ang sterile cotton swab o surgical blade ug ibutang kini sa sterile tube. |
I-freeze ang mga sample sa liquid nitrogen sulod sa 3-4 ka oras ug tipigi sa liquid nitrogen o -80 degree ngadto sa long-term reservation.Gikinahanglan ang sample nga pagpadala gamit ang dry-ice.
1.Heatmap: Pagpundok sa bahandi sa mga espisye2.Functional genes annotated sa KEGG metabolic pathways3.Species correlation network4.Circos sa CARD antibiotic resistance genes
Kaso sa BMK
Ang Nanopore metagenomics makahimo sa paspas nga clinical diagnosis sa bacterial lower respiratory infection
Gipatik:Nature Biotechnology, 2019
Mga Highlight sa Teknikal
Pagsunud-sunod: Nanopore Minion
Clinical metagenomics bioinformatics: Host DNA depletion, WIMP ug ARMA analysis
Rapid detection: 6 ka oras
Taas nga pagkasensitibo: 96.6%
Pangunang mga resulta
Niadtong 2006, ang lower respiratory infection (LR) maoy hinungdan sa 3 ka milyon nga kamatayon sa tawo sa tibuok kalibotan.Ang tipikal nga pamaagi para sa LR1 pathogen detection mao ang cultivation, nga adunay dili maayo nga pagkasensitibo, taas nga turn-around-time ug kulang sa giya sa sayo nga antibiotic therapy.Ang paspas ug tukma nga pagdayagnos sa microbial dugay nang dinalian nga panginahanglan.Si Dr. Justin gikan sa Unibersidad sa East Anglia ug ang iyang mga kauban malamposong nakamugna ug Nanopore-based metagenomic method para sa pathogen detection.Sumala sa ilang workflow, 99.99% sa host DNA mahimong mahurot.Ang pagtuki sa mga pathogen ug antibiotic resistant nga mga gene mahimong mahuman sa 6 ka oras.
Reperensya
Charalampous, T. , Kay, GL , Richardson, H. , Aydin, A. , & O'Grady, J. .(2019).Ang Nanopore metagenomics makahimo sa paspas nga clinical diagnosis sa bacterial lower respiratory infection.Nature Biotechnology, 37(7), 1.