● Isolation ug cultivation-free para sa microbial community profiling
● Taas nga resolusyon sa pag-ila sa ubos nga kadagaya nga mga espisye sa mga sample sa kinaiyahan
● Ang ideya sa "meta-" nag-apil sa tanang biological features sa functional level, species level ug gene level, nga nagpakita sa dinamikong panglantaw nga mas duol sa realidad.
● Ang BMK nagtigom og daghang kasinatian sa lain-laing klase sa sample nga adunay kapin sa 10,000 ka sample nga naproseso.
Plataporma | Pagsunodsunod | Girekomenda nga datos | Panahon sa pag-usab |
Plataporma sa Illumina NovaSeq | PE150 | 6 G/10 G/20 G | 45 ka adlaw sa pagtrabaho |
● Pagkontrol sa kalidad sa hilaw nga datos
● Metagenome nga asembliya
● Non-redundant gene set ug anotasyon
● Pagtuki sa kadaiyahan sa espisye
● Pagtuki sa diversity sa genetic function
● Inter-grupo nga pagtuki
● Pagtuki sa asosasyon batok sa eksperimento nga mga hinungdan
Alang saMga kinuha sa DNA:
Sample Type | kantidad | Konsentrasyon | Kaputli |
Mga kinuha sa DNA | > 30 ng | > 1 ng/μl | OD260/280= 1.6-2.5 |
Para sa mga sample sa kinaiyahan:
Sampol nga tipo | Girekomenda nga pamaagi sa sampling |
Yuta | Gidaghanon sa sampling: gibanabana.5 g;Ang nahabilin nga nalaya nga substansiya kinahanglan nga tangtangon gikan sa nawong;Paggaling sa dagkong mga piraso ug pag-agi sa 2 mm nga filter;Aliquot samples sa sterile EP-tube o cyrotube para sa reservation. |
Mga hugaw | Gidaghanon sa sampling: gibanabana.5 g;Pagkolekta ug pag-aliquot sa mga sample sa sterile EP-tube o cryotube para sa reserbasyon. |
Mga sulod sa tinai | Ang mga sample kinahanglan nga iproseso ubos sa aseptiko nga kondisyon.Hugasi ang nakolekta nga tissue gamit ang PBS;Centrifuge ang PBS ug kolektaha ang precipitant sa EP-tubes. |
Lapok | Gidaghanon sa sampling: gibanabana.5 g;Pagkolekta ug pag-aliquot sa sludge sample sa sterile EP-tube o cryotube para sa reserbasyon |
Katubigan | Alang sa sample nga adunay limitado nga gidaghanon sa microbial, sama sa tubig sa gripo, tubig sa atabay, ug uban pa, Pagkolekta ug labing menos 1 L nga tubig ug ipasa ang 0.22 μm nga salaan aron mapauswag ang microbial sa lamad.Ibutang ang lamad sa sterile nga tubo. |
Panit | Pag-ayo sa pag-scrape sa panit gamit ang sterile cotton swab o surgical blade ug ibutang kini sa sterile tube. |
I-freeze ang mga sample sa liquid nitrogen sulod sa 3-4 ka oras ug tipigi sa liquid nitrogen o -80 degree ngadto sa long-term reservation.Gikinahanglan ang sample nga pagpadala gamit ang dry-ice.
1.Histogram: Pag-apod-apod sa mga espisye
2.Functional genes annotated sa KEGG metabolic pathways
3. Mapa sa init: Nagkalainlain nga mga gimbuhaton base sa paryente nga kadagaya sa gene4.Circos sa CARD antibiotic resistance genes
Kaso sa BMK
Prevalence sa antibiotic resistance genes ug bacterial pathogens ubay sa soil-mangrove root continuum
Gipatik:Journal of Hazardous Materials, 2021
Estratehiya sa pagkasunodsunod:
Materyal: DNA extracts sa upat ka tipik sa mangrove root related samples: unplanted soil, rhizosphere, episphere ug endosphere compartments
Plataporma: Illumina HiSeq 2500
Target: Metagenome
16S rRNA gene V3-V4 nga rehiyon
Pangunang mga resulta
Ang metagenomic sequencing ug metabarcoding profiling sa soil-root continuum sa mangrove saplings giproseso aron matun-an ang dissemination sa antibiotic resistance genes (ARGs) gikan sa yuta ngadto sa mga tanom.Ang datos sa metagenomic nagpadayag nga 91.4% sa mga gene nga resistensya sa antibiotic kasagarang giila sa tanan nga upat ka mga compartment sa yuta nga gihisgutan sa ibabaw, nga nagpakita sa usa ka padayon nga uso.Ang 16S rRNA amplicon sequencing nakamugna og 29,285 ka sequence, nga nagrepresentar sa 346 ka espisye.Ang paghiusa sa pag-profile sa mga espisye pinaagi sa amplicon sequencing, kini nga pagsabwag nakit-an nga independente sa microbiota nga adunay kalabotan sa gamut, bisan pa, mahimo kini nga mapadali pinaagi sa mobile sa mga genetic nga elemento.Kini nga pagtuon nag-ila sa pagdagayday sa mga ARG ug mga pathogens gikan sa yuta ngadto sa mga tanom pinaagi sa interconnected soil-root continuum.
Reperensya
Wang, C. , Hu, R. , Kusog, PJ , Zhuang, W. , & Shu, L. .(2020).Prevalence sa antibiotic resistance genes ug bacterial pathogens ubay sa yuta–mangrove root continuum.Journal of Hazardous Materials, 408, 124985.