● Isolation-free ug paspas nga pag-ila sa microbial composition sa environmental samples
● Taas nga resolusyon sa ubos nga abunda nga mga sangkap sa mga sample sa kinaiyahan
● Pinakabag-o nga dagan sa pag-analisar sa QIIME2 nga adunay lainlain nga pagtuki sa termino sa database, anotasyon, OTU/ASV.
● Taas nga throughput, mas taas nga katukma
● Magamit sa nagkalain-laing microbial community studies
● Ang BMK adunay daghang kasinatian nga adunay kapin sa 100,000 ka sample/tuig,nagsakup sa yuta, tubig, gas, putik, hugaw, tinai, panit, sabaw sa fermentation, mga insekto, tanum, ug uban pa.
● Gipadali sa BMKCloud ang paghubad sa datos nga adunay 45 ka personal nga mga himan sa pag-analisar
PagsunodsunodPlataporma | Library | Girekomenda nga datos nga abot | Gibanabana nga oras sa turn-around |
Plataporma sa Illumina NovaSeq | PE250 | 50K/100K/300K Tag | 30 ka adlaw |
● Pagkontrol sa kalidad sa hilaw nga datos
● OTU clustering/De-noise(ASV)
● OTU anotasyon
● Pagkalainlain sa Alpha
● Beta diversity
● Inter-grupo nga pagtuki
● Pagtuki sa asosasyon batok sa eksperimento nga mga hinungdan
● Function gene prediction
KayMga kinuha sa DNA:
Sample Type | kantidad | Konsentrasyon | Kaputli |
Mga kinuha sa DNA | > 30 ng | > 1 ng/μl | OD260/280= 1.6-2.5 |
Para sa mga sample sa kinaiyahan:
Sampol nga tipo | Girekomenda nga pamaagi sa sampling |
Yuta | Gidaghanon sa sampling: gibanabana.5 g;Ang nahabilin nga nalaya nga substansiya kinahanglan nga tangtangon gikan sa nawong;Paggaling sa dagkong mga piraso ug pag-agi sa 2 mm nga filter;Aliquot samples sa sterile EP-tube o cyrotube para sa reservation. |
Mga hugaw | Gidaghanon sa sampling: gibanabana.5 g;Pagkolekta ug pag-aliquot sa mga sample sa sterile EP-tube o cryotube para sa reserbasyon. |
Mga sulod sa tinai | Ang mga sample kinahanglan nga iproseso ubos sa aseptiko nga kondisyon.Hugasi ang nakolekta nga tissue gamit ang PBS;Centrifuge ang PBS ug kolektaha ang precipitant sa EP-tubes. |
Lapok | Gidaghanon sa sampling: gibanabana.5 g;Pagkolekta ug pag-aliquot sa sludge sample sa sterile EP-tube o cryotube para sa reserbasyon |
Katubigan | Alang sa sample nga adunay limitado nga gidaghanon sa microbial, sama sa tubig sa gripo, tubig sa atabay, ug uban pa, Pagkolekta ug labing menos 1 L nga tubig ug ipasa ang 0.22 μm nga salaan aron mapauswag ang microbial sa lamad.Ibutang ang lamad sa sterile nga tubo. |
Panit | Pag-ayo sa pag-scrape sa panit gamit ang sterile cotton swab o surgical blade ug ibutang kini sa sterile tube. |
I-freeze ang mga sample sa liquid nitrogen sulod sa 3-4 ka oras ug tipigi sa liquid nitrogen o -80 degree ngadto sa long-term reservation.Gikinahanglan ang sample nga pagpadala gamit ang dry-ice.
1.Pag-apod-apod sa mga espisye
2. Mapa sa kainit: Pagpundok sa kadagaya sa mga espisye
3. Talagsaon nga paksyon nga kurba
4.Pagtuki sa NMDS
5. Lefse analysis
Kaso sa BMK
Tambok nga mga Indibidwal nga adunay ug walay Type 2 Diabetes nagpakita sa lain-laing gut microbial functional kapasidad ug komposisyon
Gipatik:Cell Host ug Microbe, 2019
Estratehiya sa pagkasunodsunod:
Maniwang nga dili diabetes (n=633);Tambok nga dili diabetes (n=494);Tambok-Type 2 nga diabetes (n=153);
Target nga rehiyon: 16S rDNA V1-V2
Plataporma: Illumina Miseq (NGS-based amplicon sequencing)
Ang subset sa DNA extracts gipailalom sa metagenomic sequencing sa Illumina Hiseq
Pangunang mga resulta
Ang mga microbial profiling niining mga sakit nga metaboliko malampuson nga nalahi.
Pinaagi sa pagtandi sa microbial nga mga bahin nga namugna sa 16S sequencing, ang hilabihang katambok nakit-an nga nalangkit sa mga pagbag-o sa microbial nga komposisyon, indibidwal nga mga bahin, ilabi na ang mahinungdanon nga pagkunhod sa Akkermansia, Faecalibacterium, Oscillibacter, Alistipes, ug uban pa. .
Reperensya
Thingholm, LB, ug uban pa."Ang Tambok nga mga Indibidwal nga adunay ug wala ang Type 2 Diabetes Nagpakita Lahi nga Gut Microbial Functional Capacity ug Komposisyon."Cell Host ug Microbe26.2(2019).