Ізаляцыя ядраў дасягаецца з дапамогай 10× Genomics ChromiumTM, якая складаецца з васьміканальнай мікрафлюідычнай сістэмы з падвойнымі скрыжаваннямі.У гэтай сістэме шарыкі геля са штрых-кодамі і праймерам, ферменты і адно ядро інкапсулююцца ў кроплі алею памерам з наналітр, утвараючы гелевыя шарыкі ў эмульсіі (GEM).Пасля таго, як GEM сфарміраваны, лізіс клетак і вызваленне штрых-кодаў выконваюцца ў кожным GEM.мРНК адваротна транскрыбуюцца ў малекулы кДНК са штрых-кодамі 10× і UMI, якія ў далейшым падлягаюць канструкцыі стандартнай бібліятэкі секвенирования.
Клетка / Тканіна | Прычына |
Несвежая замарожаная тканіна | Немагчыма атрымаць свежыя або даўно захаваныя арганізацыі |
Цягліцавая клетка, мегакарыяцыт, тлушч… | Дыяметр ячэйкі занадта вялікі, каб увайсці ў прыбор |
Печань… | Занадта далікатныя, каб разбіцца, не могуць адрозніць асобныя клеткі |
Нейронавая клетка, мозг… | Больш адчувальны, лёгка стрэс, зменіць вынікі паслядоўнасці |
Падстраўнікавая жалеза, шчытападобная жалеза… | Багаты эндагеннымі ферментамі, якія ўплываюць на выпрацоўку завісі асобных клетак |
Аднаядзерныя | Аднаклетачны |
Неабмежаваны дыяметр клеткі | Дыяметр клеткі: 10-40 мкм |
Матэрыялам можа быць замарожаная тканіна | Матэрыялам павінна быць свежая тканіна |
Нізкі стрэс замарожаных клетак | Апрацоўка ферментамі можа выклікаць стрэсавую рэакцыю клетак |
Выдаляць эрытрацыты не трэба | Эрытрацыты неабходна выдаліць |
Ядзерная выражае біяінфармацыю | Уся клетка выказвае біяінфармацыю |
Бібліятэка | Стратэгія паслядоўнасці | Аб'ём дадзеных | Узоры патрабаванняў | тканіна |
10 × аднаядзерная бібліятэка Genomics | 10x Genomics -Illumina PE150 | Прыбл. 100 000 чытанняў/ячэйку.100-200 Гб | Нумар клеткі: >2 × 105 Ячэйка канц.пры 700-1200 клетак/мкл | ≥ 200 мг |
Для атрымання больш падрабязнай інфармацыі аб інструкцыях па падрыхтоўцы ўзораў і працоўным працэсе абслугоўвання, калі ласка, не саромейцеся гаварыць з aBMKGENE эксперт
1. Кропкавая кластэрызацыя
2. Цеплавая карта кластарызацыі багацця выразаў маркера
3.Maker размеркаванне генаў у розных кластарах
4.Аналіз траекторыі ячэйкі/псеўдачас