يتم تحقيق عزل النوى بواسطة 10× Genomics ChromiumTM، والذي يتكون من نظام ميكروفلويديك ثماني قنوات مع معابر مزدوجة.في هذا النظام، يتم تغليف حبات الهلام مع الرموز الشريطية والتمهيدي والإنزيمات ونواة واحدة في قطرة زيت بحجم النانوليتر، مما يؤدي إلى توليد مستحلب هلامي (GEM).بمجرد تشكيل GEM، يتم تنفيذ تحلل الخلايا وإطلاق الباركود في كل GEM.يتم نسخ mRNA بشكل عكسي إلى جزيئات cDNA مع 10 × باركود وUMI، والتي تخضع أيضًا لبناء مكتبة التسلسل القياسي.
الخلية / الأنسجة | سبب |
الأنسجة المجمدة غير الطازجة | غير قادر على الحصول على المنظمات الجديدة أو المحفوظة منذ فترة طويلة |
الخلايا العضلية، الخلايا الكبيرة، الدهون… | قطر الخلية كبير جدًا بحيث لا يمكن دخوله إلى الجهاز |
الكبد… | هشة للغاية بحيث لا يمكن كسرها، وغير قادرة على التمييز بين الخلايا المفردة |
الخلية العصبية، الدماغ… | أكثر حساسية، وسهلة للتأكيد، سوف تغير نتائج التسلسل |
البنكرياس والغدة الدرقية… | غني بالإنزيمات الذاتية، مما يؤثر على إنتاج المعلق أحادي الخلية |
نواة واحدة | خلية واحدة |
قطر الخلية غير محدود | قطر الخلية: 10-40 ميكرومتر |
يمكن تجميد المواد الأنسجة | يجب أن تكون المادة أنسجة طازجة |
انخفاض ضغط الخلايا المجمدة | قد يسبب العلاج الإنزيمي تفاعل إجهاد الخلية |
لا يلزم إزالة خلايا الدم الحمراء | من الضروري إزالة خلايا الدم الحمراء |
النووية تعبر عن المعلومات الحيوية | الخلية بأكملها تعبر عن المعلومات الحيوية |
مكتبة | استراتيجية التسلسل | حجم البيانات | متطلبات العينة | منديل |
10 × مكتبة الجينوم أحادية النواة | 10x الجينوم -إلومينا PE150 | 100.000 قراءة/خلية تقريبًا.100-200 جيجابايت | رقم الخلية: >2×105 مؤتمرات الخلية.عند 700-1200 خلية/ميكروليتر | ≥ 200 ملغ |
لمزيد من التفاصيل حول إرشادات إعداد العينات وسير عمل الخدمة، فلا تتردد في التحدث إلى أخبير بمكجين
1. تجميع البقع
2.علامة وفرة التعبير عن خريطة الحرارة العنقودية
3. توزيع جينات صانع في مجموعات مختلفة
4.تحليل مسار الخلية/الزمن الكاذب