Die isolasie van kerne word bewerkstellig deur 10× Genomics ChromiumTM, wat bestaan uit agt-kanaal mikrofluïdiese stelsel met dubbele kruisings.In hierdie stelsel word 'n jelkrale met strepieskodes en onderlaag, ensieme en 'n enkele kern in 'n nanoliter-grootte oliedruppel ingekapsuleer, wat Gel Bead-in-Emulsion (GEM) genereer.Sodra GEM gevorm is, word sellise en vrystelling van strepieskodes in elke GEM uitgevoer.mRNA word omgekeerd getranskribeer in cDNA-molekules met 10× strepieskodes en UMI, wat verder onderhewig is aan standaardvolgorde-biblioteekkonstruksie.
Sel / Weefsel | Rede |
Onvars bevrore weefsel | Kan nie vars of organisasies wat lank gered is, kry nie |
Spiersel, Megakariosiet, Vet... | Seldeursnee is te groot om die instrument binne te gaan |
Lewer… | Te broos om te breek, nie in staat om enkelselle te onderskei nie |
Neuronsel, brein … | Meer sensitief, maklik om te beklemtoon, sal die volgorde resultate verander |
Pankreas, Skildklier … | Ryk aan endogene ensieme, wat die produksie van enkelselsuspensie beïnvloed |
Enkelkern | Enkelsel |
Onbeperkte sel deursnee | Seldeursnee: 10-40 μm |
Die materiaal kan bevrore weefsel wees | Die materiaal moet vars weefsel wees |
Lae stres van bevrore selle | Ensiembehandeling kan selstresreaksies veroorsaak |
Geen rooibloedselle hoef verwyder te word nie | Rooibloedselle moet verwyder word |
Kern druk bio-inligting uit | Die hele sel druk bio-inligting uit |
Biblioteek | Opeenvolgingstrategie | Datavolume | Voorbeeldvereistes | Sneesdoekie |
10× Genomika enkelkern biblioteek | 10x Genomika -Illumina PE150 | 100,000 lees/sel ongeveer.100-200 Gb | Selnommer: >2× 105 Selkons.by 700-1 200 sel/μL | ≥ 200 mg |
Vir meer besonderhede oor voorbeeldvoorbereidingsleiding en dienswerkvloei, praat gerus met aBMKGENE deskundige
1.Vlekgroepering
2. Merker uitdrukking oorvloed groepering hittekaart
3. Maak geen verspreiding in verskillende trosse
4.Seltrajekanalise/pseudotyd